| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 绪论 | 第10-21页 |
| 1.1 课题背景 | 第10-11页 |
| 1.1.1 链霉菌次级代谢生物合成研究进展 | 第10页 |
| 1.1.2 聚酮化合物和聚酮合酶研究进展 | 第10-11页 |
| 1.2 Ⅱ型硫酯酶研究进展 | 第11-16页 |
| 1.2.1 硫酯酶的功能 | 第11-13页 |
| 1.2.2 TEⅡ在Ⅰ型PKS合成起始步骤中的功能 | 第13-14页 |
| 1.2.3 TEⅡ在Ⅰ型PKS合成延伸步骤中的功能 | 第14页 |
| 1.2.4 TEⅡ在Ⅰ型PKS合成终止步骤中的功能 | 第14-15页 |
| 1.2.5 TEⅡ在Ⅱ型PKS酶合成起始步骤中的功能 | 第15页 |
| 1.2.6 不同TEⅡ之间的互补作用及底物特异性 | 第15-16页 |
| 1.3 恰塔努加链霉菌中的TEⅡ研究 | 第16-20页 |
| 1.3.1 恰塔努加链霉菌与纳他霉素 | 第16-17页 |
| 1.3.2 纳他霉素生物合成途径 | 第17-18页 |
| 1.3.3 纳他霉素合成基因簇中的TEⅡ(ScnⅠ) | 第18-19页 |
| 1.3.4 恰塔努加链霉菌中其他TEⅡ | 第19-20页 |
| 1.4 本论文研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 引物 | 第22-24页 |
| 2.1.3 实验仪器和设备 | 第24-25页 |
| 2.1.4 培养基及培养条件 | 第25-27页 |
| 2.1.5 抗生素 | 第27页 |
| 2.2 方法 | 第27-40页 |
| 2.2.1 大肠杆菌Cosmid抽提 | 第27-28页 |
| 2.2.2 大肠杆菌质粒抽提 | 第28页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第28-30页 |
| 2.2.4 核酸片段割胶回收 | 第30页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞制备(Ca~(2+)法) | 第30页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞转化 | 第30-31页 |
| 2.2.7 恰塔努加链霉菌基因组提取 | 第31页 |
| 2.2.8 恰塔努加链霉菌孢子悬液的制备 | 第31页 |
| 2.2.9 恰塔努加链霉菌摇瓶发酵实验 | 第31-32页 |
| 2.2.10 发酵液中纳他霉素含量的测定 | 第32页 |
| 2.2.11 PCR-Targeting基因敲除 | 第32-34页 |
| 2.2.12 大肠杆菌到链霉菌的接合转移 | 第34-35页 |
| 2.2.13 接合重组子的筛选 | 第35页 |
| 2.2.14 高表达菌株的构建 | 第35-36页 |
| 2.2.15 大肠杆菌中重组蛋白表达 | 第36页 |
| 2.2.16 大肠杆菌中重组蛋白纯化 | 第36-37页 |
| 2.2.17 RNA提取 | 第37-38页 |
| 2.2.18 实时定量PCR(qRT-PCR) | 第38-40页 |
| 第三章 TEⅡ对纳他霉素产量的影响 | 第40-46页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 ScnⅠ敲除菌株构建 | 第40-41页 |
| 3.3 ScnⅠ过表达菌株构建 | 第41-42页 |
| 3.4 PKSIaTEⅡ敲除菌株构建 | 第42页 |
| 3.5 纳他霉素产量测定 | 第42-43页 |
| 3.6 qRT-PCR分析TEⅡ的mRNA表达水平 | 第43-44页 |
| 3.7 本章小结及讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 TEⅡ功能的体外酶学表征 | 第46-54页 |
| 4.1 引言 | 第46页 |
| 4.2 ScnⅠ和PKSIaTEⅡ的表达与纯化 | 第46-47页 |
| 4.3 酰基-ACP的体外生化合成 | 第47-49页 |
| 4.4 ScnⅠ与酰基-ACP的体外反应实验 | 第49-51页 |
| 4.5 PKSIaTEⅡ与酰基-ACP的体外反应实验 | 第51-52页 |
| 4.6 本章小结及讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 本文研究成果及展望 | 第54-55页 |
| 5.1 本文研究成果 | 第54页 |
| 5.2 展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 攻读硕士学位期间的主要研究成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
