| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第11-33页 |
| 1.1 绿色荧光蛋白概述 | 第11-18页 |
| 1.1.1 绿色荧光蛋白的发现 | 第11页 |
| 1.1.2 绿色荧光蛋白的结构及发光机理 | 第11-13页 |
| 1.1.3 绿色荧光蛋白的突变体 | 第13-14页 |
| 1.1.4 绿色荧光蛋白的应用 | 第14-17页 |
| 1.1.5 超电荷绿色荧光蛋白的性质及应用 | 第17-18页 |
| 1.2 PARP概述 | 第18-26页 |
| 1.2.1 PARP家族 | 第19页 |
| 1.2.2 PARP-1结构 | 第19-20页 |
| 1.2.3 PARP-1的功能 | 第20-22页 |
| 1.2.4 PARP-1的检测 | 第22-25页 |
| 1.2.5 PARP-1抑制剂与疾病治疗 | 第25-26页 |
| 1.3 MMPs简介 | 第26-32页 |
| 1.3.1 MMPs分类与结构 | 第26-28页 |
| 1.3.2 MMP-2结构、功能及意义 | 第28页 |
| 1.3.3 MMP-2的检测 | 第28-32页 |
| 1.4 本文构思 | 第32-33页 |
| 第2章 基于+36GFP/GO相互作用无标记检测PARP-1活性新方法 | 第33-48页 |
| 2.1 前言 | 第33-34页 |
| 2.2 实验部分 | 第34-37页 |
| 2.2.1 实验试剂与仪器设备 | 第34-35页 |
| 2.2.2 超电荷绿色荧光蛋白的表达与纯化 | 第35页 |
| 2.2.3 共聚焦显微镜表征的样品制备 | 第35-36页 |
| 2.2.4 PARP-1活性及其抑制剂的检测 | 第36页 |
| 2.2.5 选择性实验 | 第36页 |
| 2.2.6 caspase 3的检测实验 | 第36-37页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第37-47页 |
| 2.3.1 基于+36GFP/GO相互作用检测PARP-1的设计原理及论证 | 第37-39页 |
| 2.3.2 实验条件的优化 | 第39-43页 |
| 2.3.3 PARP-1的活性检测 | 第43页 |
| 2.3.4 基于+36GFP/GO检测PARP-1方法的选择性分析 | 第43-44页 |
| 2.3.5 基于+36GFP/GO对PARP-1抑制剂分析 | 第44-46页 |
| 2.3.6 检测caspase 3的可行性验证 | 第46-47页 |
| 2.4 小结 | 第47-48页 |
| 第3章 MMP-2敏感型荧光探针的构建 | 第48-61页 |
| 3.1 前言 | 第48-49页 |
| 3.2 材料 | 第49-51页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第49页 |
| 3.2.2 试剂 | 第49页 |
| 3.2.3 菌株和载体 | 第49-50页 |
| 3.2.4 培养基的配制 | 第50页 |
| 3.2.5 溶液和缓冲液的配制 | 第50-51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-55页 |
| 3.3.1 重组质粒pUCK-mmp-2s-30gfp的获得 | 第51-52页 |
| 3.3.2 重组质粒pCold I-mmp-2s-30gfp的构建 | 第52-54页 |
| 3.3.3 重组质粒pET28a-mmp-2s-30gfp的构建 | 第54页 |
| 3.3.4 探针MMP-2S-30GFP的表达与纯化 | 第54-55页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE | 第55页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第55-60页 |
| 3.4.1 “两步法”构建重组质粒pCold I-mmp-2s-30gfp | 第55-57页 |
| 3.4.2 “一锅法”构建重组质粒pET28a-mmp-2s-30gfp | 第57-58页 |
| 3.4.3 “两步法”和“一锅法”的比较 | 第58-59页 |
| 3.4.4 MMP-2S-30GFP的表达纯化和基本性质 | 第59-60页 |
| 3.5 小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-73页 |
| 附录 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
