| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-46页 |
| 1.1 戊型肝炎病毒研究进展 | 第18-36页 |
| 1.1.1 戊型肝炎病毒危害 | 第18页 |
| 1.1.2 HEV发现及分类 | 第18-21页 |
| 1.1.3 HEV进化史 | 第21-22页 |
| 1.1.4 HEV基因组结构 | 第22-25页 |
| 1.1.5 衣壳蛋白自组装 | 第25-27页 |
| 1.1.6 中和表位和疫苗 | 第27页 |
| 1.1.7 戊型肝炎流行情况 | 第27-30页 |
| 1.1.8 HEV的物种间传播 | 第30-32页 |
| 1.1.9 HEV传播途径 | 第32-34页 |
| 1.1.10 HEV实验室诊断 | 第34-36页 |
| 1.2 诺如病毒研究进展 | 第36-46页 |
| 1.2.1 诺如病毒发现及危害 | 第36-37页 |
| 1.2.2 诺如病毒基因组 | 第37-38页 |
| 1.2.3 诺如病毒感染及致病 | 第38-40页 |
| 1.2.4 病毒生命周期 | 第40-41页 |
| 1.2.5 病毒结构蛋白 | 第41-42页 |
| 1.2.6 VPg蛋白 | 第42-43页 |
| 1.2.7 诺如病毒、宿主与微生物之间的互作 | 第43-45页 |
| 1.2.8 鼠诺如病毒 | 第45-46页 |
| 第二章 山东地区猪戊型肝炎病毒基因组序列特征分析及感染率调查 | 第46-63页 |
| 2.1 研究背景与意义 | 第46页 |
| 2.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 2.2.1 胆汁样品 | 第46页 |
| 2.2.2 血清样品 | 第46-47页 |
| 2.3 实验仪器与试剂 | 第47-48页 |
| 2.3.1 实验试剂 | 第47页 |
| 2.3.2 主要仪器 | 第47-48页 |
| 2.4 方法 | 第48-55页 |
| 2.4.1 RT-nPCR检测胆汁或血清样品中的猪HEV orf2基因 | 第48-49页 |
| 2.4.2 猪HEV毒株完整基因组序列的扩增 | 第49-51页 |
| 2.4.3 测序及进化分析 | 第51-52页 |
| 2.4.4 提交分离鉴定的HEV序列到Gen Bank | 第52页 |
| 2.4.5 猪HEV ORF2重组蛋白的制备 | 第52-55页 |
| 2.4.6 i-ELISA | 第55页 |
| 2.4.7 统计分析 | 第55页 |
| 2.5 实验结果 | 第55-61页 |
| 2.5.1 猪胆汁样品中猪HEV检测结果 | 第55-56页 |
| 2.5.2 猪HEV orf 2 基因序列比对结果 | 第56-57页 |
| 2.5.3 山东株猪HEV：CHN-SD-sHEV | 第57-58页 |
| 2.5.4 重组蛋白表达纯化 | 第58-59页 |
| 2.5.5 确定i-ELISA cut-off值 | 第59页 |
| 2.5.6 山东地区猪HEV感染率研究 | 第59-61页 |
| 2.6 讨论 | 第61-62页 |
| 2.7 小结 | 第62-63页 |
| 第三章 两个戊型肝炎病毒共有抗原表位的鉴定 | 第63-81页 |
| 3.1 研究背景及意义 | 第63-64页 |
| 3.2 实验材料 | 第64-65页 |
| 3.2.1 血清样品 | 第64页 |
| 3.2.2 多肽 | 第64页 |
| 3.2.3 单克隆抗体 | 第64页 |
| 3.2.4 不同种属HEV毒株 | 第64-65页 |
| 3.3 实验仪器与试剂 | 第65页 |
| 3.3.1 实验试剂 | 第65页 |
| 3.3.2 主要仪器 | 第65页 |
| 3.4 实验方法 | 第65-68页 |
| 3.4.1 噬菌体展示技术筛选抗原表位 | 第65-66页 |
| 3.4.2 合成多肽 | 第66页 |
| 3.4.3 制备重组蛋白 | 第66-67页 |
| 3.4.4 间接ELISA | 第67页 |
| 3.4.5 Western Blot | 第67页 |
| 3.4.6 抗原表位与不同种属抗血清交叉反应 | 第67页 |
| 3.4.7 软件计算分析 | 第67-68页 |
| 3.4.8 免疫保护性分析 | 第68页 |
| 3.5 实验结果 | 第68-79页 |
| 3.5.1 两株禽单克隆抗体与猪HEV衣壳蛋白具有交叉反应性 | 第68-69页 |
| 3.5.2 抗原表位噬菌体生物淘选结果 | 第69-70页 |
| 3.5.3 抗原表位关键氨基酸的鉴定 | 第70-73页 |
| 3.5.4 共有抗原表位与抗禽、抗猪或抗人HEV阳性血清交叉反应 | 第73-74页 |
| 3.5.5 抗原表位保守性 | 第74-75页 |
| 3.5.6 抗原表位空间定位 | 第75-76页 |
| 3.5.7 抗原表位 3E8和 1B5对鸡没有保护性 | 第76-79页 |
| 3.6 讨论 | 第79-80页 |
| 3.7 小结 | 第80-81页 |
| 第四章 宿主细胞与诺如病毒VPg互作蛋白的鉴定 | 第81-101页 |
| 4.1 背景与意义 | 第81页 |
| 4.2 实验目的与研究路线 | 第81-82页 |
| 4.3 实验试剂与仪器 | 第82-83页 |
| 4.3.1 实验试剂 | 第82-83页 |
| 4.3.2 实验器材 | 第83页 |
| 4.4 实验方法 | 第83-88页 |
| 4.4.1 序列比对 | 第83页 |
| 4.4.2 构建GFP重组质粒 | 第83-84页 |
| 4.4.3 细胞同位素标记与培养 | 第84页 |
| 4.4.4 细胞转染 | 第84-86页 |
| 4.4.5 制备IP样品 | 第86页 |
| 4.4.6 免疫共沉淀 | 第86页 |
| 4.4.7 质谱检测 | 第86-87页 |
| 4.4.8 数据分析 | 第87页 |
| 4.4.9 验证IP结果 | 第87页 |
| 4.4.10 YBX1和G3BP1敲低对病毒感染和复制的影响 | 第87页 |
| 4.4.11 qPCR检测病毒RNA含量 | 第87-88页 |
| 4.5 实验结果 | 第88-99页 |
| 4.5.1 HuNoV和MNV VPg基因同源性分析并构建GFP标签重组质粒 | 第88-89页 |
| 4.5.2 GFP亲和纯化系统验证 | 第89-90页 |
| 4.5.3 质谱数据评估 | 第90-91页 |
| 4.5.4 筛选质谱获得与VPg相互作用蛋白 | 第91-93页 |
| 4.5.5 互作蛋白网络分析 | 第93-95页 |
| 4.5.6 宿主细胞中与VPg互作蛋白分析 | 第95-96页 |
| 4.5.7 验证互作靶蛋白 | 第96-97页 |
| 4.5.8 YBX1和G3BP1功能探究 | 第97-99页 |
| 4.6 讨论 | 第99-100页 |
| 4.7 本章小结 | 第100-101页 |
| 第五章 鼠诺如病毒VP2蛋白与宿主细胞互作蛋白的鉴定 | 第101-123页 |
| 5.1 研究背景与意义 | 第101-102页 |
| 5.2 研究目的与研究路线 | 第102-103页 |
| 5.2.1 研究目的 | 第102页 |
| 5.2.2 研究路线 | 第102-103页 |
| 5.3 实验试剂与仪器 | 第103页 |
| 5.3.1 实验试剂 | 第103页 |
| 5.3.2 实验器材 | 第103页 |
| 5.4 实验方法 | 第103-107页 |
| 5.4.1 细胞培养 | 第103-104页 |
| 5.4.2 同位素标记BV2细胞 | 第104页 |
| 5.4.3 拯救VP2-FLAG重组病毒 | 第104页 |
| 5.4.4 细胞转染 | 第104页 |
| 5.4.5 测定病毒滴度 | 第104页 |
| 5.4.6 纯化浓缩病毒 | 第104-105页 |
| 5.4.7 病毒感染细胞 | 第105-106页 |
| 5.4.8 FLAG亲和纯化 | 第106页 |
| 5.4.9 质谱检测 | 第106页 |
| 5.4.10 数据分析 | 第106页 |
| 5.4.11 制备转染VPg-linked RNA | 第106-107页 |
| 5.4.12 免疫荧光共定位 | 第107页 |
| 5.5 实验结果 | 第107-121页 |
| 5.5.1 获得高滴度重组病毒 | 第107-108页 |
| 5.5.2 FLAG亲和纯化效果验证 | 第108-109页 |
| 5.5.3 质谱检测结果评估 | 第109-110页 |
| 5.5.4 设定质谱数据阳性判定值 | 第110-111页 |
| 5.5.5 宿主细胞中与VP2互作的靶蛋白 | 第111-114页 |
| 5.5.6 验证互作靶蛋白 | 第114-115页 |
| 5.5.7 免疫荧光共定位分析VP2在病毒代谢中细胞定位 | 第115-118页 |
| 5.5.8 宿主细胞中与Ns4或VP2互作靶蛋白分析 | 第118-120页 |
| 5.5.9 宿主细胞中与Ns1/2 或VP2互作靶蛋白分析 | 第120-121页 |
| 5.6 讨论 | 第121-122页 |
| 5.7 本章小结 | 第122-123页 |
| 全文总结 | 第123-124页 |
| 研究创新点 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-147页 |
| 致谢 | 第147-149页 |
| 作者简介 | 第149页 |
