摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-9页 |
文献综述 | 第13-36页 |
第一章 哺乳动物病毒非经典传播方式的研究进展 | 第13-24页 |
1.1 病毒在细胞间的传播 | 第13-21页 |
1.1.1 病毒自由扩散传播的条件及可能存在的屏障 | 第13-14页 |
1.1.2 病毒胞外自由扩散和胞间传播的利与弊 | 第14页 |
1.1.3 能够通过细胞间传播方式扩散的病毒的特征 | 第14-15页 |
1.1.4 病毒细胞间传播的机制 | 第15-16页 |
1.1.5 通过细胞间传播的病毒及其传播机制 | 第16-21页 |
1.2 外泌体依赖的病毒传播 | 第21-22页 |
1.2.1 外泌体概述 | 第21-22页 |
1.2.2 外泌体调控RNA病毒传播 | 第22页 |
1.3 展望 | 第22-24页 |
第二章 病毒通过内吞方式入侵细胞的研究进展 | 第24-36页 |
2.1 内吞途径为病毒感染提供便利 | 第24页 |
2.2 病毒内吞需要受体的介导 | 第24-25页 |
2.3 病毒内化所依赖的内吞途径 | 第25-30页 |
2.3.1 网格蛋白介导的内吞途径 | 第26页 |
2.3.2 网格蛋白和小窝非依赖的内吞途径 | 第26-27页 |
2.3.3 小窝依赖的内吞途径 | 第27-28页 |
2.3.4 病毒触发的大胞饮途径 | 第28页 |
2.3.5 其他途径 | 第28-30页 |
2.4 囊膜病毒膜突破机制 | 第30-35页 |
2.4.1 囊膜病毒膜融合概述 | 第30-31页 |
2.4.2 囊膜病毒膜融合诱导机制 | 第31-35页 |
2.5 展望 | 第35-36页 |
试验研究 | 第36-95页 |
第三章 猪瘟病毒体外培养系统中传播方式的研究 | 第36-50页 |
3.1 材料 | 第36-37页 |
3.1.1 病毒、细胞和主要试剂 | 第36-37页 |
3.1.2 主要仪器设备 | 第37页 |
3.2 方法 | 第37-39页 |
3.2.1 细胞培养与传代 | 第37页 |
3.2.2 细胞总RNA提取、cDNA合成及real-time PCR | 第37-38页 |
3.2.3 间接免疫荧光试验 | 第38页 |
3.2.4 病毒滴度检测 | 第38-39页 |
3.2.5 低熔点琼脂糖扩散限制试验 | 第39页 |
3.2.6 抗体扩散限制试验 | 第39页 |
3.2.7 数据分析 | 第39页 |
3.3 结果 | 第39-47页 |
3.3.1 CSFV间接免疫荧光法的建立 | 第39-40页 |
3.3.2 CSFV在ST细胞上增殖的检测 | 第40-41页 |
3.3.3 低熔点琼脂糖限制CSFV在体外培养系统中的传播 | 第41-44页 |
3.3.4 中和抗体对CSFV在体外培养系统中的限制作用 | 第44页 |
3.3.5 CSFV增殖与细胞增殖的关系 | 第44-47页 |
3.4 讨论 | 第47-49页 |
3.5 小结 | 第49-50页 |
第四章 猪瘟病毒通过网格蛋白介导的内吞途径入侵细胞 | 第50-65页 |
4.1 材料 | 第50-51页 |
4.1.1 病毒、细胞和主要试剂 | 第50-51页 |
4.1.2 主要仪器设备 | 第51页 |
4.2 方法 | 第51-54页 |
4.2.1 抑制剂细胞安全浓度检测 | 第51页 |
4.2.2 病毒入侵细胞的抑制剂干扰试验 | 第51-52页 |
4.2.3 细胞总RNA提取、cDNA合成及real-time PCR | 第52页 |
4.2.4 干扰载体的构建 | 第52-53页 |
4.2.5 细胞转染和阳性细胞筛选 | 第53页 |
4.2.6 间接免疫荧光试验 | 第53页 |
4.2.7 数据分析 | 第53-54页 |
4.3 结果 | 第54-62页 |
4.3.1 抑制剂CPZ和dynasore在ST细胞上安全浓度的检测 | 第54页 |
4.3.2 网格蛋白组装抑制剂CPZ对CSFV入侵ST细胞的抑制效果检测 | 第54-57页 |
4.3.3 动力蛋白抑制剂dynasore对CSFV入侵ST细胞的抑制效果检测 | 第57-59页 |
4.3.4 网格蛋白重链和动力蛋白2型shRNA干扰细胞的建立和检测 | 第59-60页 |
4.3.5 CSFV在CHC和dynamin-2干扰细胞上的入侵检测 | 第60-62页 |
4.4 讨论 | 第62-64页 |
4.5 小结 | 第64-65页 |
第五章 猪瘟病毒入侵对内体依赖性的研究 | 第65-76页 |
5.1 材料 | 第65页 |
5.2 方法 | 第65-67页 |
5.2.1 NH_4Cl抑制试验 | 第65-66页 |
5.2.2 Real-time PCR | 第66页 |
5.2.3 干扰载体的构建和细胞转染 | 第66-67页 |
5.2.4 间接免疫荧光试验(IFA) | 第67页 |
5.2.5 数据分析 | 第67页 |
5.3 结果 | 第67-73页 |
5.3.1 CSFV感染ST细胞依赖于酸性环境诱导 | 第67-68页 |
5.3.2 Rab5基因干扰细胞的构建及鉴定 | 第68-69页 |
5.3.3 Rab5基因下调抑制CSFV感染ST细胞 | 第69-70页 |
5.3.4 Rab7基因干扰细胞的构建及鉴定 | 第70-71页 |
5.3.5 Rab7基因下调抑制CSFV对ST的细胞的侵染 | 第71-72页 |
5.3.6 Rab9基因干扰细胞的构建及鉴定 | 第72-73页 |
5.3.7 CSFV感染ST细胞依赖于Rab9 | 第73页 |
5.4 讨论 | 第73-75页 |
5.5 小结 | 第75-76页 |
第六章 GBF1和Rab2对猪瘟病毒复制的影响 | 第76-95页 |
6.1 材料 | 第76-77页 |
6.2 方法 | 第77-79页 |
6.2.1 抑制剂病毒增殖干扰试验 | 第77页 |
6.2.2 Real-time PCR | 第77-78页 |
6.2.3 干扰载体的构建和细胞转染 | 第78页 |
6.2.4 间接免疫荧光试验 | 第78页 |
6.2.5 病毒滴度检测 | 第78-79页 |
6.2.6 Western blot | 第79页 |
6.2.7 慢病毒表达载体的构建及病毒包装 | 第79页 |
6.2.8 数据分析 | 第79页 |
6.3 结果 | 第79-92页 |
6.3.1 BFA能够抑制CSFV增殖 | 第79-81页 |
6.3.2 CSFV增殖对GCA敏感 | 第81页 |
6.3.3 GBF1表达量下调抑制CSFV的增殖 | 第81-85页 |
6.3.4 Rab2表达量下调抑制CFSV的增殖 | 第85-88页 |
6.3.5 CSFV增殖不依赖于ARF1 | 第88-90页 |
6.3.6 过表达GBF1和Rab2促进CSFV增殖 | 第90-92页 |
6.4 讨论 | 第92-94页 |
6.5 小结 | 第94-95页 |
结论 | 第95页 |
本论文的创新点 | 第95页 |
有待进一步研究的问题 | 第95-96页 |
参考文献 | 第96-115页 |
主要缩略词和中英文对照表 | 第115-117页 |
致谢 | 第117-118页 |
作者简介 | 第118-119页 |