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小麦扩展蛋白基因TaEXPA2的功能分析

符号说明第1-9页
中文摘要第9-12页
Abstract第12-15页
1 前言第15-29页
   ·扩展蛋白的定义第16-20页
   ·扩展蛋白结构、与细胞壁的结合和促进细胞壁松弛的机制第20-24页
   ·生长发育表型与扩展蛋白基因表达第24页
   ·根特异性发育与扩展表达基因表达第24-25页
   ·胁迫响应和基因操作调控扩展蛋白的表达第25-27页
   ·扩展蛋白研究仍需解决的主要问题第27页
   ·本研究目的意义第27-29页
2 材料与方法第29-45页
   ·实验材料与处理第29-32页
     ·植物材料第29页
     ·材料培养与处理第29-30页
       ·小麦的培养和激素处理第29页
       ·烟草的培养和处理第29-30页
       ·拟南芥的培养第30页
     ·菌株与质粒第30页
     ·酶及生化试剂第30页
     ·引物第30-32页
   ·分子生物学实验方法第32-42页
     ·CTAB法微量法提取基因组DNA第32-33页
     ·Tail-PCR扩增TaEXPA2的启动子第33-34页
     ·利用TRIZOL试剂盒提取RNA第34页
     ·反转录cDNA第一链的合成第34页
     ·载体构建第34-36页
       ·Ta EXPA2::GFP表达载体构建第34-35页
       ·转化烟草的载体构建第35页
       ·转化拟南芥的载体构建第35-36页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化第36页
       ·大肠杆菌感受态细胞的制备第36页
       ·大肠杆菌感受态细胞的转化第36页
     ·根癌农杆菌LBA4404,GV3101感受态细胞的制备第36-37页
     ·洋葱表皮瞬时转化第37页
     ·烟草转化和筛选第37-39页
       ·农杆菌培养第37页
       ·烟草转化、培养和植株再生第37-38页
       ·转基因烟草的定量PCR筛选第38页
       ·转基因烟草扩展蛋白Western鉴定第38-39页
       ·转基因烟草扩展蛋白活性鉴定第39页
     ·拟南芥转化和筛选第39页
     ·荧光定量PCR第39-40页
     ·羰基蛋白检测(Western blot)第40-42页
       ·提取羰基化蛋白第40-41页
       ·羰基化蛋白Western(转膜)第41页
       ·封闭及杂交第41-42页
   ·植物生理实验方法第42-44页
     ·叶圆片分析第42-43页
     ·叶片叶绿素含量测定第43页
     ·叶片相对含水量和失水速率的测定第43页
     ·丙二醛(MDA)和相对电导的测定第43页
     ·DAB和NBT染色第43页
     ·光参数的测定第43页
     ·钠离子染色和钠钾离子含量的测定第43-44页
     ·抗氧化酶活性测定第44页
   ·实验数据统计分析第44-45页
3 结果与分析第45-75页
   ·克隆和分析TaEXPA2启动子中的顺式作用元件第45-46页
   ·TaEXPA2的表达模式分析第46-47页
   ·TaEXPA2的亚细胞定位第47-48页
   ·过表达TaEXPA2转基因烟草的转化和筛选第48-49页
   ·过表达TaEXPA2转基因烟草荚增多第49-51页
   ·过表达TaEXPA2转基因烟草的抗旱能力分析第51-57页
     ·过表达TaEXPA2转基因烟草抗旱性增强第51-53页
     ·过表达TaEXPA2增强了转基因烟草的保水能力第53-54页
     ·过表达TaEXPA2增强了干旱条件下转基因烟草的抗氧化能力第54-57页
   ·过表达TaEXPA2的转基因烟草盐胁迫耐性分析第57-67页
     ·过表达TaEXPA2转基因烟草抗盐性增强第57-60页
     ·盐胁迫条件下叶片相对含水量(RWC)、水势、可溶性糖和脯氨酸含量变化第60页
     ·盐胁迫下转基因烟草叶片和根系中钠钾离子含量的变化第60-61页
     ·过表达TaEXPA2提高了盐胁迫条件下转基因烟草的抗氧化能力第61-65页
     ·小麦中Ta EXPA2蛋白积累对脱落酸(ABA)信号和盐胁迫的响应第65-67页
   ·小麦扩展蛋白TaEXPA2提高转基因植株抗氧化能力的可能机制第67-75页
     ·氧化胁迫诱导小麦TaEXPA2基因的表达第67-68页
     ·过表达TaEXPA2转基因拟南芥的氧化胁迫抗性增强第68-69页
     ·atexpa2突变体的过氧化物酶活性降低第69-71页
     ·转基因回补后拟南芥突变体的抗氧化能力增强第71-73页
     ·拟南芥细胞壁POD基因的表达第73-75页
4 讨论第75-81页
5 结论第81-82页
参考文献第82-92页
致谢第92-93页
攻读学位期间发表论文第93页

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