符号说明 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-12页 |
Abstract | 第12-15页 |
1 前言 | 第15-29页 |
·扩展蛋白的定义 | 第16-20页 |
·扩展蛋白结构、与细胞壁的结合和促进细胞壁松弛的机制 | 第20-24页 |
·生长发育表型与扩展蛋白基因表达 | 第24页 |
·根特异性发育与扩展表达基因表达 | 第24-25页 |
·胁迫响应和基因操作调控扩展蛋白的表达 | 第25-27页 |
·扩展蛋白研究仍需解决的主要问题 | 第27页 |
·本研究目的意义 | 第27-29页 |
2 材料与方法 | 第29-45页 |
·实验材料与处理 | 第29-32页 |
·植物材料 | 第29页 |
·材料培养与处理 | 第29-30页 |
·小麦的培养和激素处理 | 第29页 |
·烟草的培养和处理 | 第29-30页 |
·拟南芥的培养 | 第30页 |
·菌株与质粒 | 第30页 |
·酶及生化试剂 | 第30页 |
·引物 | 第30-32页 |
·分子生物学实验方法 | 第32-42页 |
·CTAB法微量法提取基因组DNA | 第32-33页 |
·Tail-PCR扩增TaEXPA2的启动子 | 第33-34页 |
·利用TRIZOL试剂盒提取RNA | 第34页 |
·反转录cDNA第一链的合成 | 第34页 |
·载体构建 | 第34-36页 |
·Ta EXPA2::GFP表达载体构建 | 第34-35页 |
·转化烟草的载体构建 | 第35页 |
·转化拟南芥的载体构建 | 第35-36页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第36页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第36页 |
·根癌农杆菌LBA4404,GV3101感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
·洋葱表皮瞬时转化 | 第37页 |
·烟草转化和筛选 | 第37-39页 |
·农杆菌培养 | 第37页 |
·烟草转化、培养和植株再生 | 第37-38页 |
·转基因烟草的定量PCR筛选 | 第38页 |
·转基因烟草扩展蛋白Western鉴定 | 第38-39页 |
·转基因烟草扩展蛋白活性鉴定 | 第39页 |
·拟南芥转化和筛选 | 第39页 |
·荧光定量PCR | 第39-40页 |
·羰基蛋白检测(Western blot) | 第40-42页 |
·提取羰基化蛋白 | 第40-41页 |
·羰基化蛋白Western(转膜) | 第41页 |
·封闭及杂交 | 第41-42页 |
·植物生理实验方法 | 第42-44页 |
·叶圆片分析 | 第42-43页 |
·叶片叶绿素含量测定 | 第43页 |
·叶片相对含水量和失水速率的测定 | 第43页 |
·丙二醛(MDA)和相对电导的测定 | 第43页 |
·DAB和NBT染色 | 第43页 |
·光参数的测定 | 第43页 |
·钠离子染色和钠钾离子含量的测定 | 第43-44页 |
·抗氧化酶活性测定 | 第44页 |
·实验数据统计分析 | 第44-45页 |
3 结果与分析 | 第45-75页 |
·克隆和分析TaEXPA2启动子中的顺式作用元件 | 第45-46页 |
·TaEXPA2的表达模式分析 | 第46-47页 |
·TaEXPA2的亚细胞定位 | 第47-48页 |
·过表达TaEXPA2转基因烟草的转化和筛选 | 第48-49页 |
·过表达TaEXPA2转基因烟草荚增多 | 第49-51页 |
·过表达TaEXPA2转基因烟草的抗旱能力分析 | 第51-57页 |
·过表达TaEXPA2转基因烟草抗旱性增强 | 第51-53页 |
·过表达TaEXPA2增强了转基因烟草的保水能力 | 第53-54页 |
·过表达TaEXPA2增强了干旱条件下转基因烟草的抗氧化能力 | 第54-57页 |
·过表达TaEXPA2的转基因烟草盐胁迫耐性分析 | 第57-67页 |
·过表达TaEXPA2转基因烟草抗盐性增强 | 第57-60页 |
·盐胁迫条件下叶片相对含水量(RWC)、水势、可溶性糖和脯氨酸含量变化 | 第60页 |
·盐胁迫下转基因烟草叶片和根系中钠钾离子含量的变化 | 第60-61页 |
·过表达TaEXPA2提高了盐胁迫条件下转基因烟草的抗氧化能力 | 第61-65页 |
·小麦中Ta EXPA2蛋白积累对脱落酸(ABA)信号和盐胁迫的响应 | 第65-67页 |
·小麦扩展蛋白TaEXPA2提高转基因植株抗氧化能力的可能机制 | 第67-75页 |
·氧化胁迫诱导小麦TaEXPA2基因的表达 | 第67-68页 |
·过表达TaEXPA2转基因拟南芥的氧化胁迫抗性增强 | 第68-69页 |
·atexpa2突变体的过氧化物酶活性降低 | 第69-71页 |
·转基因回补后拟南芥突变体的抗氧化能力增强 | 第71-73页 |
·拟南芥细胞壁POD基因的表达 | 第73-75页 |
4 讨论 | 第75-81页 |
5 结论 | 第81-82页 |
参考文献 | 第82-92页 |
致谢 | 第92-93页 |
攻读学位期间发表论文 | 第93页 |