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活禽市场PM2.5微生物气溶胶监测及其对小鼠肺部损伤与诱导免疫反应

中文摘要第1-18页
Abstract第18-23页
1. 引言第23-55页
   ·微生物气溶胶的概述第23-28页
     ·微生物气溶胶的概念第23页
     ·微生物气溶胶的特性第23-25页
       ·微生物气溶胶来源的多相性第23-24页
       ·微生物气溶胶种类的多样性第24页
       ·微生物气溶胶活性的易变性第24页
       ·微生物气溶胶播散的三维性第24页
       ·微生物气溶胶沉积的再生性第24-25页
       ·微生物气溶胶感染的广泛性第25页
     ·微生物气溶胶对人类健康的危害第25页
     ·微生物气溶胶的检测第25-28页
       ·惯性撞击类第25-27页
       ·静电沉着类第27页
       ·过滤阻留类第27页
       ·生物采样类第27-28页
     ·本实验室微生物气溶胶的相关研究第28页
   ·大气颗粒物的概述第28-30页
     ·大气细颗粒物PM_(2.5) 的来源第29页
     ·大气细颗粒物对健康的危害第29-30页
   ·大气细颗粒物与微生物气溶胶的相关性第30-33页
     ·空气中常见细菌及其危害第31-32页
     ·空气中常见真菌及其危害第32-33页
   ·高通量测序技术第33-39页
     ·高通量测序技术类型第34-36页
       ·SOLiD测序技术第34页
       ·Solexa测序技术第34-35页
       ·Roche 454测序技术第35-36页
     ·高通量测序技术的应用第36-37页
       ·高通量测序技术在全基因组中的应用第36页
       ·高通量测序技术在RNA测序中的应用第36-37页
       ·高通量测序技术在染色质免疫共沉淀技术中的应用第37页
       ·高通量测序技术在DNA甲基化分析中的应用第37页
     ·高通量测序技术在微生物学研究中的应用第37-39页
       ·高通量测序技术在细菌分类学中的应用第37-38页
       ·高通量测序技术在转录组学研究中的应用第38页
       ·高通量测序技术在微生物菌群多样性研究中的应用第38-39页
   ·H5亚型禽流感病毒概况第39-43页
     ·禽流感病毒的检测方法第40-43页
       ·病毒的分离与鉴定第40-41页
       ·血清学检测第41-42页
       ·分子生物学诊断第42-43页
   ·先天性免疫系统概况第43-49页
     ·TLRs的概况第44-46页
       ·主要的TLRs受体及其作用第44-46页
     ·主要的细胞因子及其功能第46-49页
       ·干扰素第46-47页
       ·白细胞介素第47-48页
       ·趋化因子第48-49页
       ·肿瘤坏死因子第49页
   ·蛋白质组学第49-53页
     ·蛋白质组学的概念第49-50页
     ·蛋白质组学的研究内容及意义第50-51页
     ·蛋白质组学主要技术第51-53页
       ·蛋白质分离技术第51-52页
       ·蛋白质鉴定技术第52页
       ·生物信息学技术第52-53页
   ·研究目的和意义第53-55页
2. 材料和方法第55-80页
   ·实验材料第55-59页
     ·PM_(2.5) 和PM_(10)的采集第55页
     ·实验动物第55页
     ·实验所用主要试剂及试剂盒第55页
     ·主要实验溶液的配制第55-58页
       ·分子生物学试剂配制第55-56页
       ·Western-bolt主要实验试剂的配置第56-57页
       ·蛋白质组学所需试剂的配置:第57-58页
     ·主要仪器设备第58-59页
   ·实验方法第59-80页
     ·活禽市场环境PM_(2.5) 中细菌和真菌的多样性及全年动态变化规律第59-63页
       ·样品的采集第59-60页
       ·样品DNA的提取第60页
       ·PCR扩增第60-61页
       ·PCR产物的混样和纯化第61-62页
       ·文库构建和上机测序第62-63页
       ·信息分析流程第63页
     ·H5亚型禽流感病毒real-time RT-PCR方法的建立及应用第63-68页
       ·引物和探针的设计第63页
       ·病毒RNA的提取第63-64页
       ·cNDA的合成第64页
       ·荧光定量PCR反应条件第64-65页
       ·质粒标准品的制备第65-67页
       ·H5亚型禽流感病毒荧光定量PCR特异性鉴定第67页
       ·H5亚型禽流感病毒荧光定量PCR敏感性和重复性试验第67-68页
       ·活禽市场环境空气样品的采集及H5亚型禽流感病毒的检测第68页
     ·不同粒径气溶胶成分(PM_(2.5)+, PM_(2.5)-, PM_(10)+,PM_(10)-)刺激小鼠后免疫相关因子的表达及病理性肺损伤的研究第68-72页
       ·试验动物第68页
       ·PM_(2.5) 和PM_(10)的收集第68页
       ·PM_(2.5) 和PM_(10)的处理第68-69页
       ·不同粒径气溶胶成分(PM_(2.5)+,PM_(2.5)-,PM_(10)+,PM_(10)-)单一刺激小鼠引起的肺损伤(急性感染试验)第69-72页
       ·不同粒径气溶胶成分(PM_(2.5)+,PM_(2.5)-,PM_(10)+,PM_(10)-)重复刺激小鼠引起的肺损伤(慢性感染试验)第72页
     ·PM_(2.5) 感染小鼠后肺脏差异蛋白组研究第72-80页
       ·试验动物第72-73页
       ·PM_(2.5) 的收集第73页
       ·小鼠的感染试验第73页
       ·小鼠肺脏蛋白样品的处理第73页
       ·肺脏蛋白的浓缩第73-74页
       ·肺脏蛋白浓度测定与验证第74页
       ·IPG胶条的水化第74-75页
       ·等电聚焦第75页
       ·胶条平衡第75页
       ·二向电泳第75-77页
       ·硝酸银染色第77页
       ·凝胶分析第77-78页
       ·质谱鉴定第78页
       ·Western Blot验证差异蛋白第78-80页
3. 实验结果第80-116页
   ·活禽市场环境PM_(2.5) 中细菌的多样性及全年动态变化规律第80-86页
     ·测序数据的处理第80-81页
     ·PM_(2.5) 中细菌的多样性及全年动态变化第81-84页
     ·活禽市场环境PM_(2.5) 浓度及PM_(2.5) 中细菌多样性第84-86页
       ·泰安市城区PM_(2.5) 浓度与活禽市场环境PM_(2.5) 浓度的比较第84-85页
       ·活禽市场环境PM_(2.5) 中的细菌气溶胶多样性第85-86页
   ·活禽市场环境PM_(2.5) 中真菌的多样性及全年动态变化规律第86-91页
     ·测序数据的处理第86-87页
     ·PM_(2.5) 中真菌的多样性及全年动态变化第87-90页
     ·活禽市场环境PM_(2.5) 中真菌气溶胶的多样性第90-91页
   ·气载H5亚型禽流感病毒real-time RT-PCR方法的建立及应用第91-94页
     ·H5亚型禽流感病毒荧光定量PCR特异性第91页
     ·H5亚型禽流感病毒荧光定量PCR标准曲线的建立第91-93页
       ·标准曲线第91-92页
       ·H5亚型禽流感病毒荧光定量标准曲线的敏感性第92页
       ·H5亚型禽流感病毒荧光定量标准曲线的重复性第92-93页
     ·活禽市场环境中H5 AIV气溶胶的real-time RT-PCR检测第93-94页
   ·不同粒径气溶胶成分(PM_(2.5)~+, PM_(2.5)~-, PM_(10)~+,PM_(10)~-)刺激小鼠后免疫相关因子的表达及病理性肺损伤的研究第94-105页
     ·活禽市场环境PM_(2.5) 和PM_(10)中细菌的多样性和相对丰度第94-95页
     ·活禽市场环境PM_(2.5) 和PM_(10)中真菌的多样性和相对丰度第95-97页
     ·不同粒径气溶胶成分(PM_(2.5)+,PM_(2.5)-,PM_(10)~+,PM_(10)~-)单一刺激小鼠引起的肺损伤(急性感染试验)第97-102页
       ·不同粒径气溶胶成分(PM_(2.5)~+,PM_(2.5)~-,PM_(10)~+,PM_(10)~-)单一刺激小鼠后肺部病理组织学结果第98-99页
       ·不同粒径气溶胶成分(PM_(2.5)~+, PM_(2.5)~-, PM_(10)~+,PM_(10)~-)单一刺激小鼠后肺部模式识别受体及细胞因子和趋化因子的检测第99-102页
     ·不同粒径气溶胶成分(PM_(2.5)~+,PM_(2.5)~-,PM_(10)~+,PM_(10)~-)重复刺激小鼠引起的肺损伤(慢性感染试验)第102-105页
       ·不同粒径气溶胶成分(PM_(2.5)~+,PM_(2.5~)-,PM_(10)~+,PM_(10)~-)重复刺激小鼠后肺部病理组织学结果第102-103页
       ·不同粒径气溶胶成分(PM_(2.5)~+,PM_(2.5)~-,PM_(10)~+,PM_(10)~-)重复刺激小鼠后肺部模式识别受体及细胞因子和趋化因子的检测第103-105页
   ·PM_(2.5) 感染小鼠后肺脏差异蛋白组研究第105-116页
     ·小鼠肺脏组织双向电泳结果第105-106页
     ·差异表达蛋白的分析结果第106-107页
     ·差异表达蛋白的质谱鉴定结果第107-109页
     ·差异表达蛋白质的功能分析第109-113页
       ·GO分析第109-111页
       ·IPA分析第111-113页
     ·小鼠肺脏差异蛋白的Western Blot检测第113-116页
4. 讨论第116-125页
   ·活禽市场环境PM_(2.5) 中细菌多样性及动态变化规律第117-119页
   ·活禽市场环境PM_(2.5) 中真菌多样性及动态变化规律第119-120页
   ·气载H5亚型AIV real-time RT-PCR方法的建立及应用第120-121页
   ·不同粒径气溶胶成分(PM_(2.5)~+,PM_(2.5)~-,PM_(10)~+,PM_(10)~-)引起小鼠肺损伤的研究(急性感染试验和慢性感染试验)第121-123页
   ·PM_(2.5) 感染小鼠肺脏的差异蛋白质组研究第123-125页
5. 结论第125-126页
参考文献第126-153页
附录第153-156页
致谢第156-157页
攻读学位期间发表论文情况第157页

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