产α-氨基酸酯酰基转移酶重组大肠杆菌的构建及发酵优化
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| ·L-丙氨酰-L-谷氨酰胺概述 | 第8-9页 |
| ·L-谷氨酰胺 | 第8-9页 |
| ·L-丙氨酰-L-谷氨酰胺 | 第9页 |
| ·二肽合成方法及国内外研究进展 | 第9-12页 |
| ·化学法合成 | 第9-10页 |
| ·生物酶法合成 | 第10-12页 |
| ·L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的测定方法 | 第12页 |
| ·本论文的立题意义与主要研究内容 | 第12-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-24页 |
| ·材料 | 第14-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第14页 |
| ·实验试剂 | 第14-15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15-16页 |
| ·主要溶液 | 第16-17页 |
| ·重组质粒的构建方法 | 第17-20页 |
| ·α-氨基酸酯酰基转移酶的优化设计 | 第17页 |
| ·pUC19-phoC-SAET的基因合成 | 第17页 |
| ·pES-Ptrp2-SAET的构建 | 第17-20页 |
| ·不同重组质粒的构建 | 第20页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第20页 |
| ·细胞培养条件 | 第20-21页 |
| ·完整细胞生产丙谷二肽的反应条件 | 第21页 |
| ·氨基酸酯酰基转移酶酶活的测定 | 第21页 |
| ·HPLC检测丙谷二肽的方法 | 第21页 |
| ·TLC检测丙谷二肽的方法 | 第21-22页 |
| ·全细胞催化反应条件优化 | 第22页 |
| ·发酵条件优化 | 第22-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-49页 |
| ·产Α-氨基酸酯酰基转移酶重组大肠杆菌的构建 | 第24-33页 |
| ·α-氨基酸酯酰基转移酶的基因优化 | 第24-28页 |
| ·重组质粒的构建 | 第28-31页 |
| ·α-氨基酸酯酰基转移酶的表达 | 第31-32页 |
| ·α-氨基酸酯酰基转移酶表达质粒的选择 | 第32-33页 |
| ·α-氨基酸酯酰基转移酶表达宿主的选择 | 第33页 |
| ·全细胞催化反应条件的优化 | 第33-36页 |
| ·温度对全细胞催化反应的影响 | 第34页 |
| ·pH对全细胞催化反应的影响 | 第34-35页 |
| ·反应时间对全细胞催化反应的影响 | 第35页 |
| ·底物浓度对全细胞催化反应的影响 | 第35-36页 |
| ·发酵培养基与发酵条件优化 | 第36-44页 |
| ·培养基组分的单因素优化 | 第36-40页 |
| ·培养基组分的正交实验 | 第40-42页 |
| ·培养条件的优化 | 第42-44页 |
| ·重组大肠杆菌发酵曲线 | 第44页 |
| ·定性检测丙谷二肽方法的探索 | 第44-49页 |
| ·展开剂的选择 | 第46-47页 |
| ·标准曲线与线性范围 | 第47-48页 |
| ·精确度实验 | 第48-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-50页 |
| 主要结论 | 第49页 |
| 展望 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第55页 |
