| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| ·猪流行性腹泻病(PED) | 第12页 |
| ·PED 的危害及流行病学 | 第12页 |
| ·PEDV 的病原特性 | 第12-13页 |
| ·PEDV 的分类 | 第12页 |
| ·PEDV 的一般特性 | 第12-13页 |
| ·PEDV 的培养特性 | 第13页 |
| ·PEDV 的分子生物学研究进展 | 第13-14页 |
| ·PEDV 的基因组结构 | 第13页 |
| ·PEDV 基因组编码的蛋白 | 第13-14页 |
| ·PED 疫苗的研究进展 | 第14-15页 |
| ·灭活疫苗 | 第14-15页 |
| ·细胞弱毒疫苗 | 第15页 |
| ·转基因植物疫苗 | 第15页 |
| ·DNA 疫苗的研究进展 | 第15-16页 |
| ·DNA 疫苗概念 | 第15页 |
| ·DNA 疫苗优点 | 第15-16页 |
| ·DNA 疫苗的应用 | 第16页 |
| ·白细胞介素18 | 第16-17页 |
| ·研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-32页 |
| ·试验材料 | 第18-19页 |
| ·质粒、工程菌、细胞株 | 第18页 |
| ·试验动物 | 第18页 |
| ·主要工具酶、抗体及分子生物学试剂盒 | 第18页 |
| ·主要生化试剂 | 第18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18-19页 |
| ·试验方法 | 第19-31页 |
| ·PEDV S、S1 基因pIL-18 基因的亚克隆及其真核表达质粒的构建 | 第19-23页 |
| ·pIL-18 原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·重组质粒pET-30a-pIL-18 的诱导表达及纯化 | 第24-25页 |
| ·抗pIL-18 多克隆抗体的制备及鉴定 | 第25-26页 |
| ·pVAX1-PEDV S、pVAX1-PEDV S1 和pVAX1-pIL-18 重组质粒体外瞬时表达及其产物的检测 | 第26页 |
| ·pVAX1-PEDV S、pVAX1-PEDV S1 和pVAX1-pIL-18 重组质粒在小鼠体内的应用及其免疫效果的检测 | 第26-31页 |
| ·数据处理 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-46页 |
| ·PEDV S、S1 基因及pIL-18 基因的亚克隆及其真核表达质粒的构建和鉴定 | 第32-34页 |
| ·PEDV S、S1 重组真核表达质粒的构建和鉴定 | 第32-33页 |
| ·pIL-18 重组真核表达质粒的构建和鉴定 | 第33-34页 |
| ·pET-30a-pIL-18 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第34-36页 |
| ·pET-30a-pIL-18 重组蛋白的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·pET-30a-pIL-18 重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| ·抗pIL-18 多克隆抗体的制备和鉴定 | 第36-37页 |
| ·酶联免疫吸附实验（ELISA）检测多抗效价 | 第36页 |
| ·Western blot 检测抗pIL-18 多克隆抗体特异性 | 第36-37页 |
| ·真核表达质粒体外转染及其表达产物的检测 | 第37-38页 |
| ·PEDV S、S1 基因真核表达质粒体外转染及其表达产物的检测 | 第37-38页 |
| ·小鼠脾脏及外周血T 淋巴细胞增殖功能动态变化 | 第38-40页 |
| ·小鼠脾脏T 淋巴细胞增殖功能动态变化 | 第38-39页 |
| ·小鼠外周血T 淋巴细胞增殖功能动态变化 | 第39-40页 |
| ·小鼠外周血抗PEDV IgG 抗体含量动态变化 | 第40-41页 |
| ·小鼠外周血IFN-γ的检测 | 第41-42页 |
| ·小鼠外周血IL-4 的检测 | 第42页 |
| ·血清中和反应 | 第42-43页 |
| ·免疫小鼠脾脏及血液特异性细胞毒性T 淋巴细胞活性检测 | 第43-46页 |
| ·免疫小鼠脾脏特异性细胞毒性T 淋巴细胞活性检测 | 第43-44页 |
| ·免疫小鼠外周血特异性细胞毒性T 淋巴细胞活性检测 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-51页 |
| ·PEDV S 基因与pIL-18 联合免疫设计 | 第46页 |
| ·影响DNA 疫苗免疫效果的因素 | 第46-47页 |
| ·免疫途径 | 第46-47页 |
| ·真核载体的选择 | 第47页 |
| ·细胞因子对DNA 疫苗的佐剂效应 | 第47页 |
| ·细胞因子接种剂量对免疫效果的影响 | 第47页 |
| ·重组真核表达质粒体外瞬时转染分析 | 第47-48页 |
| ·小鼠免疫后脾脏和外周血T 淋巴细胞增殖效果 | 第48页 |
| ·小鼠外周血抗PEDV IgG 抗体含量动态变化 | 第48-49页 |
| ·小鼠免疫DNA 疫苗后IFN-γ和IL-4 的动态变化分析 | 第49页 |
| ·血清中和反应分析 | 第49页 |
| ·免疫小鼠脾脏及血液特异性细胞毒性T 淋巴细胞活性 | 第49-51页 |
| 5. 结论 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 附录: 主要溶液的配制 | 第56-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58页 |
