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猪水肿病大肠杆菌毒力因子鸡卵黄抗体制备及Stx2e基因LAMP方法建立

摘要第1-12页
英文摘要第12-15页
1 引言第15-32页
   ·猪水肿病概述第15-16页
   ·猪水肿病的主要毒力因子第16-19页
     ·志贺毒素Ⅱ型变异体 (Stx2e)第16-18页
     ·F18ab (F107)菌毛第18-19页
   ·猪水肿病的防治第19-21页
     ·药物防治第19-20页
     ·疫苗免疫第20页
     ·卵黄抗体防治第20-21页
   ·卵黄抗体研究概况第21-25页
     ·卵黄抗体的形成第21页
     ·卵黄抗体的结构第21-22页
     ·卵黄抗体的特点第22-23页
     ·卵黄抗体的抗菌作用机制第23页
     ·卵黄抗体的应用第23-25页
   ·环介导等温扩增 (LAMP)第25-30页
     ·LAMP 的引物设计第25-26页
     ·LAMP 的原理第26-28页
     ·LAMP 的特点第28-29页
     ·LAMP 的应用第29-30页
   ·研究的目的与意义第30-32页
2 材料与方法第32-43页
   ·实验材料第32-34页
     ·菌株、质粒、实验动物及细胞系第32页
     ·主要试剂第32-33页
     ·主要仪器第33页
     ·PCR 扩增引物及 LAMP 扩增引物第33-34页
   ·实验方法第34-43页
     ·志贺毒素的提取及蛋白浓度测定第34-35页
     ·F18ab 菌毛的提取及蛋白浓度测定第35页
     ·Stx2eB 蛋白的诱导表达第35-36页
     ·大肠杆菌 F18ab 菌毛 FedF 基因的表达第36-37页
     ·重组蛋白的纯化及蛋白浓度测定第37页
     ·免疫原的鉴定第37-38页
     ·卵黄抗体的制备第38-42页
     ·Stx2e 基因 LAMP 检测方法的建立第42-43页
3 结果第43-64页
   ·Stx2e 的提取、鉴定及蛋白浓度测定第43-45页
     ·Stx2e+菌株的 PCR 鉴定第43页
     ·Stx2e 的提取第43-44页
     ·Stx2e 的鉴定第44-45页
   ·F18ab 菌毛的提取、鉴定及蛋白浓度测定第45-46页
     ·F18ab+菌株的 PCR 鉴定及电镜观察第45-46页
     ·F18ab 菌毛的提取及 Western blot 分析第46页
   ·Stx2eB 重组蛋白的诱导表达、纯化及 Western blot 分析第46-47页
   ·Fed F 重组蛋白的表达与鉴定第47-50页
     ·Fed F 基因的克隆第47-48页
     ·Fed F 重组质粒的 PCR 及酶切鉴定第48-49页
     ·FedF 重组表达质粒的 PCR 及酶切鉴定第49页
     ·Fed F 重组蛋白的诱导表达、纯化及 Western blot 鉴定第49-50页
   ·重组蛋白浓度测定第50-51页
   ·卵黄抗体的鉴定第51-52页
     ·抗 Stx2e 卵黄抗体的琼脂扩散试验鉴定第51页
     ·抗 F18ab 菌毛蛋白卵黄抗体的平板凝集试验第51页
     ·抗 Stx2eB 蛋白卵黄抗体的 Western blot 鉴定第51-52页
     ·抗FedF蛋白卵黄抗体的Western blot鉴定第52页
   ·卵黄抗体安全检验第52-53页
     ·物理性状检验第52-53页
     ·无菌检验第53页
     ·支原体检验第53页
     ·安全检验第53页
   ·卵黄抗体效价检测第53-56页
   ·卵黄抗体效力评价第56-59页
     ·体外吸附与吸附抑制试验第56-57页
     ·中和试验第57-59页
   ·Stx2e 基因 LAMP 检测方法结果第59-64页
     ·LAMP 扩增产物的检测结果第59-60页
     ·LAMP 反应温度及反应时间的筛选结果第60页
     ·LAMP 的特异性反应结果第60-61页
     ·LAMP 的敏感性试验结果第61-62页
     ·模拟样品的检测结果第62-64页
4 讨论第64-68页
   ·卵黄抗体在预防仔猪水肿病方面的应用前景第64-65页
   ·免疫原及抗体的鉴定第65-66页
   ·卵黄抗体的提取第66页
   ·LAMP 的引物设计第66-67页
   ·LAMP 方法改善的初步探索第67-68页
5 结论第68-69页
致谢第69-70页
参考文献第70-81页
攻读硕士学位期间发表的学术论文第81页

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