| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 英文缩略表 | 第7-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 鸭疫里默氏菌概述 | 第12-17页 |
| ·病原菌诊断 | 第12页 |
| ·毒力因子及外膜蛋白研究 | 第12-14页 |
| ·疫苗研究 | 第14-16页 |
| ·其他 | 第16-17页 |
| 2 细菌PHOP研究进展 | 第17-18页 |
| ·phoP在细菌中的调控 | 第17页 |
| ·Mg~(2+)、H~+等对PhoP-PhoQ功能的调节 | 第17页 |
| ·phoP基因调节功能 | 第17-18页 |
| 3. 选题目的和意义 | 第18-20页 |
| 第二部分 实验内容 | 第20-58页 |
| 第一章 鸭疫里默氏杆菌血清1型PHOP基因生物信息学分析及功能鉴定 | 第20-30页 |
| 1 材料 | 第20页 |
| ·试验材料 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·仪器 | 第20页 |
| ·主要试剂配方 | 第20页 |
| 2 试验方法 | 第20-23页 |
| ·RA-phoP基因及编码氨基酸序列分析 | 第20-21页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌phoP基因功能鉴定 | 第21-23页 |
| 3 结果 | 第23-29页 |
| ·phoP编码氨基酸序列对比 | 第23-24页 |
| ·RA-CH1 phoP编码蛋白的生物信息学分析 | 第24-27页 |
| ·RA-CH1潜在phoP基因扩增 | 第27-28页 |
| ·重组质粒鉴定及其对菌株存活率影响 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 第二章 鸭疫里默氏杆菌PHOP基因克隆表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备 | 第30-37页 |
| 1 试验材料 | 第30-31页 |
| ·质粒、菌株 | 第30页 |
| ·试验动物 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·基因克隆相关试剂 | 第30页 |
| ·主要试验仪器 | 第30-31页 |
| 2 试验方法 | 第31-33页 |
| ·RA-CH1 phoP基因扩增 | 第31页 |
| ·重组原核表达质粒pET32a-phoP的构建 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pET32a-phoP的诱导表达 | 第32页 |
| ·重组蛋白表达的检测 | 第32-33页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌PhoP蛋白的纯化 | 第33页 |
| ·兔抗鸭疫里默氏杆菌PhoP蛋白多克隆抗体制备 | 第33页 |
| 3 试验结果 | 第33-35页 |
| ·RA-CH1 phoP基因的PCR扩增、T克隆及表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第34页 |
| ·重组蛋白PhoP的纯化 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白抗体效价检测 | 第35页 |
| 4 分析与讨论 | 第35-37页 |
| ·引物设计 | 第35页 |
| ·重组蛋白表达优化及纯化 | 第35-37页 |
| 第三章 鸭疫里默氏杆菌PHOP基因缺失株的构建 | 第37-53页 |
| 1. 试验材料 | 第37-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第37页 |
| ·主要分子生物学试剂及生化试剂 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·试剂配制 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38页 |
| 2 试验方法 | 第38-44页 |
| ·pRE112-LSR自杀质粒构建 | 第38-40页 |
| ·RA-CH1△phoP基因缺失株构建及鉴定 | 第40-41页 |
| ·RA-CH1△phoP基因缺失株生物学特性 | 第41-44页 |
| 3 试验结果 | 第44-51页 |
| ·RA-CH1 phoP基因上下游同源臂的克隆 | 第44页 |
| ·phoP基因上下游同源臂的融合 | 第44-45页 |
| ·壮观霉素抗性基因的扩增 | 第45页 |
| ·重组自杀质粒pRE112-LSR的构建 | 第45-46页 |
| ·RA-CH1△phoP基因缺失株的筛选及鉴定 | 第46-47页 |
| ·RA-CH1△phoP基因缺失株生物学特性 | 第47-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 突变株疫苗免疫效果评价 | 第53-58页 |
| 1 试验材料及方法 | 第53页 |
| ·试验材料 | 第53页 |
| ·主要溶液配制 | 第53页 |
| 2 试验方法 | 第53-55页 |
| ·菌株复苏 | 第53页 |
| ·免疫实验 | 第53页 |
| ·免疫效果评价 | 第53-54页 |
| ·攻毒保护实验 | 第54页 |
| ·免疫雏鸭后野生株感染雏鸭剖解及组织病理学变化 | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-57页 |
| ·疫苗免疫效果 | 第55页 |
| ·攻毒保护实验及实验动物生长情况 | 第55-56页 |
| ·人工感染雏鸭光镜下组织学病理变化 | 第56-57页 |
| 4. 讨论 | 第57-58页 |
| 图版说明 | 第58-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
