| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第11-13页 |
| 第一章 泛素化与类泛素(SUMO)化在甲壳动物免疫中的功能 | 第13-37页 |
| 一、甲壳动物疾病 | 第13-18页 |
| 1. 研究意义 | 第13-14页 |
| 2. 侵染甲壳动物的主要病原体 | 第14-16页 |
| 3. 白斑综合征病毒研究概况 | 第16-18页 |
| 二、泛素化与SUMO化 | 第18-25页 |
| 1. 泛素化与SUMO化途径的组分 | 第18-19页 |
| 2. 泛素化与SUMO化的反应过程 | 第19-22页 |
| 3. 泛素化与SUMO化的功能 | 第22-25页 |
| 三、泛素化途径与免疫 | 第25-30页 |
| 1. 酵母中的泛素化 | 第25-26页 |
| 2. 植物中泛素化与免疫反应 | 第26-27页 |
| 3. 无脊椎动物的泛素化与发育和免疫 | 第27-28页 |
| 4. 高等动物泛素化与免疫反应 | 第28-29页 |
| 5. 病原微生物与宿主泛素化系统的相互作用 | 第29-30页 |
| 四、病毒感染与宿主SUMO化修饰的关系 | 第30-35页 |
| 1. 病毒蛋白与宿主SUMO化相互作用 | 第32-33页 |
| 2. 病毒利用宿主SUMO化系统修饰自身蛋白 | 第33-35页 |
| 五、研究目的和技术路线 | 第35-37页 |
| 第二章 对虾泛素结合酶E2(FcUbc)介导的泛素化抑制白斑综合征病毒复制 | 第37-74页 |
| 一、引言 | 第37-38页 |
| 二、材料和方法 | 第38-52页 |
| 1. 试剂和仪器 | 第38-39页 |
| 2. 实验材料和免疫刺激 | 第39-40页 |
| 3. 菌株、载体和细胞系 | 第40页 |
| 4. RNA提取和DNA合成 | 第40-41页 |
| 5. FcUbc cDNA全长克隆 | 第41-42页 |
| 6. 序列分析 | 第42-43页 |
| 7. FcUbc mRNA水平表达模式 | 第43页 |
| 8. 重组蛋白表达和纯化 | 第43-47页 |
| 9. 多克隆抗体制备 | 第47页 |
| 10. Western blot | 第47-48页 |
| 11.免疫组织化学 | 第48页 |
| 12.对虾攻毒死亡率试验 | 第48-49页 |
| 13.重组蛋白抗病毒活性试验 | 第49页 |
| 14. 蛋白质pull-down实验 | 第49页 |
| 15. 免疫细胞化学 | 第49-50页 |
| 16. 体外泛素化实验 | 第50页 |
| 17.果蝇S2细胞培养、传代、冻存和复苏 | 第50-51页 |
| 18 果蝇S2细胞载体构建、转染和病毒感染 | 第51-52页 |
| 19 免疫共沉淀检测蛋白相互作用 | 第52页 |
| 三、结果 | 第52-71页 |
| 1. FcUbc的cDNA序列克隆与分析 | 第52-55页 |
| 2. FcUbc的组织分布和表达模式 | 第55-56页 |
| 3 蛋白的重组表达与纯化 | 第56-58页 |
| 4. FcUbc抗体检测内源蛋白的细胞定位 | 第58-60页 |
| 5.重组FcUbc具有抗病毒活性 | 第60-62页 |
| 6. pull-down实验证实FcUbc结合病毒RING结构域蛋白 | 第62-63页 |
| 7.突变体mFcUbc丧失抗病毒能力，不能与WRD结合 | 第63-65页 |
| 8 注射重组FcUbc能够进入血细胞 | 第65-66页 |
| 9 FcUbc体外催化WSSV RING结构域蛋白泛素化 | 第66-67页 |
| 10. S2细胞FcUbc介导WSSV RING结构域蛋白泛素化 | 第67-68页 |
| 11.果蝇S2细胞支持WSSV基因复制和蛋白表达 | 第68-70页 |
| 12. FcUbc介导感染S2的WSSV RING蛋白泛素化 | 第70-71页 |
| 四、讨论 | 第71-74页 |
| 第三章 克氏原螯虾SUMO结合酶E2(PcUbc)介导SUMO化促进白斑结合症病毒复制 | 第74-99页 |
| 一、引言 | 第74-75页 |
| 二、材料和方法 | 第75-81页 |
| 1.试剂和仪器 | 第75页 |
| 2.菌株载体 | 第75-76页 |
| 3. 实验材料和免疫刺激 | 第76页 |
| 4. RNA提取和DNA合成 | 第76页 |
| 5 FcUbc cDNA全长克隆 | 第76页 |
| 6. 序列分析 | 第76页 |
| 7 小龙虾UBC9和SUMO mRNA水平表达模式 | 第76-77页 |
| 8. 重组蛋白表达和纯化 | 第77-78页 |
| 9. 多克隆抗体制备 | 第78页 |
| 10. Western blot | 第78页 |
| ·注射重组蛋白与攻毒试验 | 第78-79页 |
| 12. 蛋白质pull-down实验 | 第79页 |
| 13. 体外SUMO化实验 | 第79-80页 |
| 14. RNA干扰与攻毒试验 | 第80-81页 |
| 三、结果 | 第81-95页 |
| 1. 基因克隆与鉴定 | 第81-83页 |
| 2. 序列分析 | 第83-86页 |
| 3. 组织分布与病毒刺激后表达模式 | 第86-87页 |
| 4. 重组蛋白表达与纯化 | 第87-89页 |
| 5. 注射重组蛋白增强WSSV晚期基因表达 | 第89-91页 |
| 6 克氏原螯虾UBC9体外结合WSSV IE蛋白 | 第91-92页 |
| 7. UBC9介导WSV051体外SUMO化修饰 | 第92-93页 |
| 8. 小龙虾UBC9和SUMO的RNA干扰 | 第93页 |
| 9. UBC9或SUMO被干扰的龙虾中WSSV表达被抑制 | 第93-94页 |
| 10. 干扰1}BO)或 SUMO 的小龙奸攻毒后再注射相应的被,干扰細的蛋白，WSSV 基因表达^导到恢M | 第94-95页 |
| 四、讨论 | 第95-99页 |
| 总结与创新点 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-111页 |
| 致谢 | 第111-112页 |
| 在读期间发表文章 | 第112-113页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第113页 |
