| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-19页 |
| ·甲型H1N1流感概述 | 第13-16页 |
| ·甲型H1N1流感的公共卫生 | 第13-14页 |
| ·基因组编码蛋白的功能 | 第14-15页 |
| ·流感疫苗的研究进展 | 第15-16页 |
| ·杆状病毒简介 | 第16-19页 |
| ·杆状病毒表达系统 | 第17页 |
| ·杆状病毒作为哺乳动物细胞表达载体在疫苗研究中的应用 | 第17-19页 |
| 第2章 目的与意义 | 第19-20页 |
| 第3章 材料与方法 | 第20-27页 |
| ·材料 | 第20-22页 |
| ·病毒、细胞和菌株 | 第20页 |
| ·载体与质粒 | 第20页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第20页 |
| ·培养基及抗生素的配制 | 第20页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第20页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第20-21页 |
| ·其它缓冲液及试剂 | 第21页 |
| ·实验动物及鸡胚 | 第21-22页 |
| ·试验方法 | 第22-27页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第22页 |
| ·酶切产物的电泳检测 | 第22页 |
| ·酶切产物回收与纯化 | 第22页 |
| ·连接反应 | 第22页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第22页 |
| ·连接产物的转化 | 第22页 |
| ·质粒的小量制备 | 第22页 |
| ·重组Bacmid DNA的提取及鉴定 | 第22-23页 |
| ·重组杆状病毒获得 | 第23页 |
| ·tHHA1蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第23-24页 |
| ·重组杆状病毒转导哺乳动物细胞 | 第24页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA)检测目的蛋白的体外表达 | 第24页 |
| ·甲型H1N1流感病毒(IAV)的培养 | 第24页 |
| ·血凝素凝集(HA)效价的测定 | 第24页 |
| ·病毒组织半数感染剂量测定(TCID50) | 第24-25页 |
| ·IAV灭活疫苗的制备 | 第25页 |
| ·动物免疫 | 第25页 |
| ·微量中和试验 | 第25页 |
| ·血凝抑制试验 | 第25页 |
| ·ELISA的操作步骤 | 第25页 |
| ·样品总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·细胞免疫的检测 | 第26页 |
| ·IAV小鼠肺脏适应株的制备 | 第26页 |
| ·小鼠半数致死量(MLD50)测定 | 第26页 |
| ·小鼠的攻毒保护性试验 | 第26-27页 |
| 第4章 结果与分析 | 第27-38页 |
| ·重组杆状病毒的构建 | 第27-30页 |
| ·穿梭质粒Bacmid-CMV-HA/M1/NA和Bacmid-ie1-HA/M1/NA的构建 | 第27-29页 |
| ·重组杆状病毒的制备 | 第29-30页 |
| ·重组杆状病毒的扩大、纯化和滴度测定 | 第30页 |
| ·THA1蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备及重组杆状病毒体外表达的检测 | 第30-32页 |
| ·tHA1蛋白的表达纯化及多克隆抗体的制备 | 第30页 |
| ·重组杆状病毒体外表达的检测 | 第30-32页 |
| ·重组杆状病毒在小鼠体内诱导的免疫原性评价 | 第32-36页 |
| ·重组杆状病毒在小鼠体内诱发的体液免疫 | 第32-34页 |
| ·重组杆状病毒在小鼠体内诱发的细胞免疫 | 第34-36页 |
| ·重组杆状病毒在小鼠体内诱导的保护性免疫 | 第36-38页 |
| ·攻毒后小鼠的临床症状及体重变化 | 第36-37页 |
| ·攻毒后小鼠的存活率 | 第37-38页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第38-40页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·重组杆状病毒的构建 | 第38页 |
| ·重组杆状病毒在小鼠体内诱导的免疫原性反应 | 第38-39页 |
| ·重组杆状病毒在小鼠体内诱导的保护性免疫 | 第39页 |
| ·重组杆状病毒在病毒载体疫苗研制中的前景 | 第39页 |
| ·结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| 致谢 | 第46页 |
