| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一部分 抗DR5 抗体可变区基因的扩增 | 第14-26页 |
| ·前言 | 第14页 |
| ·材料 | 第14-15页 |
| ·主要试剂 | 第14页 |
| ·仪器设备 | 第14-15页 |
| ·方法 | 第15-22页 |
| ·引物设计 | 第15-17页 |
| ·细胞总RNA 的提取 | 第17页 |
| ·RT-PCR 克隆抗DR5 抗体可变区基因VL、VH | 第17-20页 |
| ·回收目的基因片段 | 第20页 |
| ·连接反应 | 第20页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第20-22页 |
| ·转化 | 第22页 |
| ·挑取及鉴定克隆 | 第22页 |
| ·结果 | 第22-24页 |
| ·抗体可变区基因的扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR 产物与T 载体连接的酶切鉴定结果 | 第23页 |
| ·抗体可变区基因的鉴定 | 第23-24页 |
| ·讨论 | 第24-26页 |
| 第二部分 抗DR5 抗体真核表达载体的构建表达及纯化 | 第26-48页 |
| ·前言 | 第26页 |
| ·材料及试剂 | 第26-33页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·仪器设备 | 第27页 |
| ·主要溶液的配制 | 第27-33页 |
| ·方法 | 第33-41页 |
| ·引物设计 | 第33页 |
| ·抗体可变区的修饰及装配 | 第33-37页 |
| ·目的基因片段和载体的双酶切 | 第37页 |
| ·连接反应 | 第37-38页 |
| ·转化 | 第38页 |
| ·挑取及鉴定克隆 | 第38页 |
| ·细胞培养及转染 | 第38-39页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第39-40页 |
| ·Western Blot | 第40-41页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-46页 |
| ·目的片段的克隆 | 第41-42页 |
| ·表达载体的构建 | 第42页 |
| ·Western blot 分析结果 | 第42-43页 |
| ·细胞凋亡形态结果 | 第43页 |
| ·流式细胞仪检测单链、四价、八价抗体的活性 | 第43-44页 |
| ·单链、四价、八价抗体的蛋白纯化 | 第44-45页 |
| ·Western blot 验证纯化目的蛋白 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第三部分 抗DR5 多价抗体的抗肿瘤作用 | 第48-60页 |
| ·前言 | 第48页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·细胞株及试剂 | 第48页 |
| ·主要试剂的配制 | 第48-49页 |
| ·主要仪器设备 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·细胞培养 | 第49-50页 |
| ·细胞表面DR5 的表达检测 | 第50页 |
| ·细胞凋亡形态学观察 | 第50页 |
| ·细胞凋亡率的检测 | 第50-51页 |
| ·单链、四价、八价抗体的细胞毒作用 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-58页 |
| ·细胞表面DR5 的表达检测结果 | 第51-52页 |
| ·单链、四价、八价抗体对肿瘤细胞的凋亡形态观察 | 第52-55页 |
| ·单链、四价、八价抗体对肿瘤细胞的凋亡检测 | 第55-56页 |
| ·单链、四价、八价抗体对肿瘤细胞的毒性测定结果 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-64页 |
| 第四部分 文献综述 | 第64-74页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第76-77页 |