| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 稳定低表达 Tim3 的 RAW264.7 巨噬细胞系的建立及鉴定 | 第14-20页 |
| ·引言 | 第14页 |
| ·材料 | 第14-15页 |
| ·试剂 | 第14-15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15页 |
| ·方法 | 第15-17页 |
| ·真核重组载体PRNAi-U6H1 的构建 | 第15页 |
| ·细胞培养 | 第15页 |
| ·细胞的冻存 | 第15-16页 |
| ·质粒的制备 | 第16页 |
| ·细胞稳定转染 | 第16页 |
| ·筛选稳定株 | 第16-17页 |
| ·采用流式细胞仪分析检测转染效率 | 第17页 |
| ·荧光定量PCR 法鉴定干扰效率 | 第17页 |
| ·统计学处理 | 第17页 |
| ·结果 | 第17-18页 |
| ·稳定低表达Tim-3 巨噬细胞系的建立 | 第17-18页 |
| ·稳定低表达Tim-3 巨噬细胞系的鉴定 | 第18页 |
| ·讨论 | 第18-20页 |
| 第二部分 Tim3 参与巨噬细胞炎症反应的机制 | 第20-30页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·方法 | 第21-23页 |
| ·常用试剂的配制 | 第21页 |
| ·细胞培养 | 第21页 |
| ·Western 免疫印记法 | 第21-22页 |
| ·蛋白定量方法 | 第22页 |
| ·细胞因子检测 | 第22页 |
| ·双荧光素酶活性分析 | 第22-23页 |
| ·流式细胞术检测膜表面细胞因子 | 第23页 |
| ·统计学分析 | 第23页 |
| ·结果 | 第23-29页 |
| ·激活或阻断Tim-3 通路对巨噬细胞TNF-α、IL-6 分泌功能的影响 | 第23-24页 |
| ·Tim-3 与模式识别受体TLR4 共同作用，对巨噬细胞活化的影响 | 第24-26页 |
| ·Western 检测Tim3 信号通路与TLR4 信号通路的相互关系 | 第26-27页 |
| ·双荧光素酶实验检测 Tim3 是否通过作用 NF-kB，进而影响 TLR4 信号通路 | 第27-28页 |
| ·流式细胞术及RT-PCR 检测Tim3 与TLR4 之间的相互拮抗效应 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| 第三部分 Tim3 在败血症中的表达 | 第30-36页 |
| ·引言 | 第30页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·实验动物 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·手术器械 | 第30-31页 |
| ·主要仪器设备 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-32页 |
| ·麻醉药的配置 | 第31页 |
| ·盲肠结扎穿孔模型（CLP）的建立 | 第31页 |
| ·小鼠脾脏淋巴细胞的分离培养 | 第31页 |
| ·细胞RNA 提取并反转录为cDNA | 第31-32页 |
| ·流式细胞术检测膜表面细胞因子 | 第32页 |
| ·荧光定量PCR 法检测Tim3 的mRNA 表达水平 | 第32页 |
| ·统计学分析 | 第32页 |
| ·结果 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-36页 |
| 第四部分 Tim3 对巨噬细胞抗原呈递功能的影响 | 第36-44页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·实验动物 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36-37页 |
| ·手术器械 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·麻醉药的配置 | 第37页 |
| ·盲肠结扎穿孔模型（CLP）的建立 | 第37页 |
| ·小鼠腹腔灌洗液细胞收集 | 第37页 |
| ·小鼠脾脏淋巴细胞的分离培养 | 第37-38页 |
| ·动物药物处理 | 第38页 |
| ·流式细胞术检测膜表面细胞因子 | 第38页 |
| ·细胞因子检测 | 第38页 |
| ·统计学分析 | 第38-39页 |
| ·结果 | 第39-41页 |
| ·体内阻断Tim-3 检测Th1,Th17 细胞的活性 | 第39页 |
| ·体外阻断Tim-3 检测Th1,Th17 细胞的活性 | 第39-40页 |
| ·体外实验检测Tim3 对巨噬细胞抗原呈递作用 | 第40-41页 |
| ·体内阻断Tim-3 检测共刺激分子CD80、CD86 表达的影响 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| 结论 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 综述 | 第48-58页 |
| 参考文献 | 第54-58页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-62页 |
