| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第12-26页 |
| 第一章 CIV以及NP蛋白的研究进展 | 第12-26页 |
| 1 引言 | 第12页 |
| 2 CIV的基本概述 | 第12-22页 |
| ·CIV的基因组特性 | 第12-14页 |
| ·CIV的生物学性状 | 第14-16页 |
| ·CIV的形态特征 | 第14-15页 |
| ·CIV的理化特性 | 第15页 |
| ·CIV的培养特性 | 第15-16页 |
| ·CIV种间传播机制及其公共卫生学意义 | 第16-17页 |
| ·CIV种间传播机制 | 第16-17页 |
| ·CIV的公共卫生学意义 | 第17页 |
| ·CIV的抗原性变异及复制 | 第17-18页 |
| ·CIV的复制 | 第17-18页 |
| ·CIV的抗原性变异 | 第18页 |
| ·CIV的流行状况及诊断方法 | 第18-22页 |
| ·CIV的流行状况 | 第18-20页 |
| ·CIV的诊断方法 | 第20-22页 |
| 3 CIV核蛋白(Neucleoprotein,NP)的研究进展 | 第22-25页 |
| ·NP蛋白的结构与功能 | 第22-23页 |
| ·NP蛋白在抗感染免疫方面的研究 | 第23页 |
| ·NP蛋白在诊断方面的研究 | 第23-25页 |
| ·基于NP蛋白开发的诊断方法 | 第23-24页 |
| ·基于NP蛋白单克隆抗体的诊断方法 | 第24-25页 |
| 4 研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二部分 实验研究 | 第26-66页 |
| 第二章 H3N2亚型犬流感病毒NP基因的优化表达及抗原性分析 | 第26-49页 |
| 1 材料与方法 | 第26-42页 |
| ·材料 | 第26-30页 |
| ·病毒和血清 | 第26页 |
| ·菌种和载体 | 第26页 |
| ·细菌培养基 | 第26-27页 |
| ·酶类及相关试剂 | 第27页 |
| ·主要物品及常用分子生物学试剂 | 第27页 |
| ·蛋白纯化用相关试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot所需试剂和溶液 | 第28-29页 |
| ·主要仪器和设备 | 第29-30页 |
| ·方法 | 第30-42页 |
| ·病毒纯化 | 第30-31页 |
| ·引物设计 | 第31页 |
| ·病毒RNA的提取及反转录 | 第31-32页 |
| ·NP基因的PCR扩增与克隆 | 第32-37页 |
| ·原核表达重组质粒的构建与鉴定 | 第37页 |
| ·可溶性NP蛋白的表达及最佳诱导条件的确定 | 第37-38页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE分析 | 第38-40页 |
| ·可溶性NP蛋白的非变性纯化 | 第40-41页 |
| ·重组NP蛋白抗原性分析 | 第41-42页 |
| 2 结果 | 第42-47页 |
| ·NP基因PCR扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒pMD-NP的鉴定 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pET32a-NP的鉴定 | 第43-44页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE分析 | 第44-46页 |
| ·重组NP蛋白的Western blot检测 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 抗H3N2 CIV NP蛋白单克隆抗体的制备 | 第49-66页 |
| 1 材料与方法 | 第49-57页 |
| ·材料 | 第49-51页 |
| ·病毒株和细胞 | 第49页 |
| ·实验动物与饲料 | 第49页 |
| ·菌种和载体 | 第49页 |
| ·细菌培养基 | 第49页 |
| ·酶类及相关试剂 | 第49-51页 |
| ·分子生物学常用其他试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器和设备 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-57页 |
| ·重组蛋白的制备 | 第51页 |
| ·实验动物的免疫 | 第51-52页 |
| ·细胞的制备 | 第52-54页 |
| ·细胞融合 | 第54页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选与克隆 | 第54-55页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第55页 |
| ·单克隆抗体腹水制备 | 第55-56页 |
| ·单克隆抗体的生物学鉴定 | 第56-57页 |
| 2 结果 | 第57-61页 |
| ·单克隆抗体的筛选以及杂交瘤细胞株的获得 | 第57-58页 |
| ·单抗亚类鉴定 | 第58页 |
| ·单抗效价的测定 | 第58-60页 |
| ·小鼠免疫效果 | 第60页 |
| ·杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性鉴定 | 第60页 |
| ·单克隆抗体的western blot分析 | 第60页 |
| ·单克隆抗体的纯化及浓度的测定 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61-66页 |
| ·免疫原的制备 | 第61-62页 |
| ·小鼠免疫 | 第62-63页 |
| ·饲养层细胞的制备 | 第63页 |
| ·脾细胞制备以及融合 | 第63-64页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选及亚克隆 | 第64页 |
| ·单抗纯化问题 | 第64页 |
| ·实验中污染问题 | 第64-65页 |
| ·抗NP蛋白单克隆抗体的应用前景 | 第65-66页 |
| 第三部分 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读硕士学位期间以第一作者身份发表的论文 | 第73页 |
