| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 前言 | 第8-13页 |
| 1 BMPR Ⅱ基因结构及其编码蛋白结构的简介: | 第8页 |
| 2 BMPR-Ⅱ基因的生物学功能 | 第8-11页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因与原发式肺动脉高血压(PPH) | 第8-10页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因与骨的形成与再生 | 第10页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因与哺乳动物早期发育 | 第10页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因在肿瘤细胞中的表达 | 第10-11页 |
| 3 研究现状及课题意义 | 第11-13页 |
| 材料与方法 | 第13-36页 |
| 1 实验材料 | 第13-16页 |
| ·菌株、载体、细胞株 | 第13页 |
| ·主要试剂 | 第13-14页 |
| ·主要工作液配制 | 第14-15页 |
| ·主要仪器 | 第15-16页 |
| 2 方法 | 第16-36页 |
| ·基本实验路线 | 第16-17页 |
| ·人胚肺成纤维细胞,巨细胞肺癌细胞,大细胞肺癌细胞的培养 | 第17-18页 |
| ·培养器皿的准备 | 第17页 |
| ·细胞的传代 | 第17页 |
| ·细胞的冻存 | 第17-18页 |
| ·细胞的复苏 | 第18页 |
| ·人胚肺成纤维细胞,巨细胞肺癌细胞,大细胞肺癌细胞总RNA的抽提及逆转录cDNA获取 | 第18-20页 |
| ·细胞总RNA的抽提 | 第18-19页 |
| ·RNA纯度及完整性鉴定 | 第19页 |
| ·逆转录获得cDNA | 第19-20页 |
| ·半定量RT-PCR方法检测BMPR-Ⅱ基因mRNA水平表达 | 第20-22页 |
| ·RT-PCR引物的设计 | 第20-21页 |
| ·RT-PCR反应条件及体系 | 第21-22页 |
| ·扩增产物的检测 | 第22页 |
| ·统计学分析 | 第22页 |
| ·荧光定量PCR方法检测BMPR-Ⅱ基因mRNA水平表达 | 第22-30页 |
| ·荧光定量标准品的构建 | 第22-26页 |
| ·荧光定量PCR实验 | 第26-28页 |
| ·荧光定量PCR的实验设计及反应条件与体系 | 第28-30页 |
| ·统计学分析 | 第30页 |
| ·BMPR-Ⅱ基因启动子区甲基化的检测 | 第30-36页 |
| ·MSP引物设计 | 第30-33页 |
| ·DNA的提取 | 第33页 |
| ·DNA亚硫酸氢盐修饰及纯化 | 第33-34页 |
| ·MSP扩增方案 | 第34-36页 |
| 结果 | 第36-53页 |
| 1 RNA纯度和完整性分析 | 第36页 |
| 2 半定量RT-PCR方法检测BMPR-Ⅱ基因mRNA水平表达 | 第36-44页 |
| ·人胚肺成纤维细胞与巨细胞肺癌细胞BMPR-Ⅱ基因表达差异检测结果 | 第37-40页 |
| ·针对转录本1,BMPR-Ⅱ基因在人胚肺成纤维细胞与巨细胞肺癌细胞中的表达差异 | 第37-39页 |
| ·针对转录本2,BMPR-Ⅱ基因在人胚肺成纤维细胞与巨细胞肺癌细胞中的表达差异 | 第39-40页 |
| ·人胚肺成纤维细胞与大细胞肺癌细胞BMPR-Ⅱ基因表达差异检测结果 | 第40-44页 |
| ·针对转录本1,BMPR-Ⅱ基因在人胚肺成纤维细胞与大细胞肺癌细胞的表达差异 | 第40-42页 |
| ·针对转录本2,BMPR-Ⅱ基因在人胚肺成纤维细胞与大细胞肺癌细胞中的表达差异 | 第42-44页 |
| 3 荧光定量PCR方法检测BMPR-Ⅱ基因mRNA水平表达 | 第44-50页 |
| ·阳性标准品质粒构建结果 | 第44-45页 |
| ·荧光定量PCR结果 | 第45-50页 |
| ·针对转录本1,BMPR-Ⅱ基因在三个细胞株中的表达差异 | 第46-48页 |
| ·针对转录本2,BMPR-Ⅱ基因在三个细胞株中的表达差异 | 第48-50页 |
| 4 BMPR-Ⅱ基因5′侧翼区甲基化的检测结果 | 第50-53页 |
| 讨论 | 第53-59页 |
| 1 细胞株的选择 | 第53页 |
| 2 荧光定量PCR技术概述 | 第53-54页 |
| 3 关于标准曲线的制作 | 第54-55页 |
| 4 DNA甲基化调控与基因沉默 | 第55-56页 |
| 5 MSP甲基化检测的实验原理 | 第56页 |
| 6 BMPR-Ⅱ基因5′侧翼区甲基化状态分析 | 第56-57页 |
| 7 BMPR-Ⅱ基因5′侧翼区甲基化状态与基因表达之间的关系分析 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 附录一:重组质粒pMD 18-V1测序结果 | 第64-65页 |
| 附录二:重组质粒pMD 18-V2测序结果 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
