| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 1 引言 | 第12-18页 |
| ·脑心肌炎病毒的国内外研究概况 | 第12-16页 |
| ·病原学 | 第12-14页 |
| ·流行病学 | 第14页 |
| ·诊断技术 | 第14-16页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第16页 |
| ·研究内容 | 第16页 |
| ·技术路线 | 第16页 |
| ·研究目的与意义 | 第16-17页 |
| ·研究目标 | 第17-18页 |
| 2 材料 | 第18-26页 |
| ·毒株、抗体和细胞 | 第18页 |
| ·载体与菌株 | 第18页 |
| ·实验动物 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-25页 |
| ·RNA 提取试剂 | 第18页 |
| ·细胞培养用溶液 | 第18-19页 |
| ·试剂 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及转化用溶液 | 第20页 |
| ·质粒DNA 提取用溶液 | 第20-21页 |
| ·诱导表达用溶液 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE 电泳用溶液 | 第21-22页 |
| ·包涵体纯化相关试剂 | 第22-23页 |
| ·Western blot 用溶液 | 第23-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳用溶液 | 第24页 |
| ·血清及抗体 | 第24页 |
| ·ELISA 用溶液 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| 3 方法 | 第26-40页 |
| ·EMCV 非结构蛋白2C 的原核表达 | 第26-36页 |
| ·猪EMCV 的复苏与增殖 | 第26页 |
| ·2C 基因的克隆 | 第26-30页 |
| ·2C 基因的原核重组表达载体的构建与鉴定 | 第30-33页 |
| ·基因工程重组表达菌的诱导表达 | 第33-34页 |
| ·重组2C 蛋白的纯化回收 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的Western blot 鉴定 | 第35页 |
| ·重组2C 蛋白的稳定性检测 | 第35-36页 |
| ·间接ELISA 方法的建立 | 第36-39页 |
| ·间接ELISA 操作程序 | 第36页 |
| ·重组2C 蛋白包被浓度和EMCV 抗体稀释浓度的确定 | 第36页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第36页 |
| ·封闭液及抗体稀释液的确定 | 第36-37页 |
| ·包被条件的确定 | 第37页 |
| ·封闭条件的确定 | 第37页 |
| ·一抗反应条件的确定 | 第37页 |
| ·酶标二抗反应条件的确定 | 第37页 |
| ·显色时间的确定 | 第37-38页 |
| ·间接ELISA 的阴阳性临界值确定 | 第38页 |
| ·交叉试验 | 第38页 |
| ·全病毒阻断试验 | 第38页 |
| ·与血清中和试验（SNT）的相关性检测 | 第38-39页 |
| ·批内和批间重复性试验 | 第39页 |
| ·EMCV 感染猪血清2C 抗体的动态分析 | 第39页 |
| ·猪场EMCV 感染的血清学检测 | 第39-40页 |
| 4 结果与分析 | 第40-57页 |
| ·EMCV 非结构蛋白2C 基因的原核表达 | 第40-47页 |
| ·EMCV 2C 基因的PCR 扩增及其原核重组表达质粒的鉴定 | 第40页 |
| ·序列测定结果 | 第40-41页 |
| ·基因工程重组菌的诱导表达 | 第41-43页 |
| ·重组2C 蛋白的包涵体表达 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| ·重组2C 蛋白的Western blot 鉴定 | 第45页 |
| ·重组蛋白稳定性 | 第45-47页 |
| ·反复冻融的影响 | 第45-46页 |
| ·室温保存不同时间的影响 | 第46-47页 |
| ·不同冷藏条件下不同保存时间的影响 | 第47页 |
| ·ELISA 最佳工作浓度 | 第47-55页 |
| ·重组2C 蛋白抗原的最适包被浓度和EMCV 抗体的最佳稀释浓度 | 第47-48页 |
| ·封闭液及抗体稀释液 | 第48-49页 |
| ·酶标二抗的最佳工作浓度 | 第49页 |
| ·包被条件 | 第49-50页 |
| ·封闭条件 | 第50页 |
| ·待检血清反应条件 | 第50-51页 |
| ·酶标二抗反应条件 | 第51页 |
| ·显色时间 | 第51-52页 |
| ·阴阳性临界值 | 第52页 |
| ·交叉试验 | 第52-53页 |
| ·全病毒阻断试验 | 第53-54页 |
| ·与中和试验检测结果的符合率 | 第54页 |
| ·批内和批间重复性 | 第54-55页 |
| ·EMCV 感染猪血清中2C 抗体的动态分析 | 第55页 |
| ·规模化猪场EMCV 感染的血清学检测 | 第55-57页 |
| ·2006~2008 年间河北省猪群脑心肌炎抗体的检测 | 第55-56页 |
| ·不同生长阶段猪群EMCV 抗体阳性率的比较 | 第56-57页 |
| 5 讨论 | 第57-61页 |
| ·EMCV 非结构蛋白2C | 第57页 |
| ·重组2C 蛋白 | 第57-58页 |
| ·重组2C 蛋白的包涵体表达 | 第58-59页 |
| ·ELISA 方法的建立 | 第59-60页 |
| ·EMCV 感染的血清学调查 | 第60-61页 |
| 6 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
