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猪圆环病毒的分离鉴定及检测方法的建立

摘要第1-5页
Abstract第5-10页
1 引言第10-22页
   ·PCV 病原特征第10-11页
     ·病毒基本特性第10-11页
     ·病毒的培养特性第11页
   ·分子生物学特征第11-12页
     ·基因组特征第11页
     ·Rap 蛋白第11页
     ·Cap 蛋白第11-12页
   ·流行病学第12页
   ·与PCV2 相关的疾病第12-14页
     ·断奶仔猪多系统衰竭综合征第12-13页
     ·猪皮炎与肾病综合征第13页
     ·猪先天性震颤(Congenital Tremors,CT)第13-14页
   ·致病机理第14-15页
     ·免疫抑制第14页
     ·其他病原对疾病发展的促进和诱导第14-15页
     ·PCV2 感染猪体内靶细胞的变化第15页
   ·PCV 诊断技术第15-20页
     ·间接免疫荧光试验(Immunofluorescence Assay,IFA)第15-16页
     ·免疫组化法(Irtmunohistoehemistry,IHC)第16页
     ·聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)第16-18页
     ·原位杂交(In Situ Hybirdzation,ISH)第18页
     ·免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase Monolayer Assay,IPMA)第18-19页
     ·酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)第19-20页
   ·PCV2 相关疾病的疫苗研究第20页
   ·防制措施第20-21页
   ·本研究的目的和意义第21-22页
2 材料与方法第22-34页
   ·毒株第22页
   ·实验动物第22页
   ·质粒与菌株第22页
   ·实验中所需要的主要试剂第22-25页
     ·细胞培养所需主要试剂第22页
     ·聚合酶链式反应(PCR)所需主要试剂第22-23页
     ·目的基因的克隆所需主要试剂第23页
     ·过氧化物酶单层实验(IPMA)所需主要试剂第23页
     ·乳胶凝集实验(LAT)所需主要试剂第23页
     ·主要试剂的配制方法第23-25页
   ·主要仪器第25页
   ·病毒的分离及生物学特性的鉴定第25-27页
     ·病料的处理第25页
     ·PCR 检测第25-26页
     ·病毒的增殖第26页
     ·兔抗分离株高免血清的制备第26页
     ·病毒毒价测定(Tissue Culture Infective Dose,TCID_(50))第26-27页
     ·理化特性鉴定第27页
     ·病毒的形态学观察第27页
   ·圆环病毒多重PCR 诊断方法的建立第27-31页
     ·引物的设计与合成第27-28页
     ·病毒培养第28页
     ·DNA 模板的制备第28页
     ·单相PCR 扩增第28页
     ·多重PCR 扩增第28-29页
     ·PCV2 PCR 产物的酶切鉴定第29页
     ·PPV 和PRV 片段PCR 产物的克隆及鉴定第29-31页
   ·正向乳胶凝集实验诊断方法的建立第31-33页
     ·乳胶的预处理第31页
     ·致敏乳胶最佳条件的确定第31-32页
     ·乳胶凝集试验的操作过程第32页
     ·PCV2 致敏乳胶的稳定性检验第32页
     ·乳胶凝集抗原质量的鉴定第32-33页
   ·乳胶的预处理第33-34页
     ·致敏乳胶最佳条件的确定第33页
     ·乳胶凝集试验的操作过程第33页
     ·血清致敏乳胶的稳定性检验第33页
     ·乳胶凝集抗原质量的鉴定第33-34页
3 实验结果第34-49页
   ·PCV2 的分离及生物学特性的鉴定第34-40页
     ·PCR 检测结果第34页
     ·免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)结果第34-35页
     ·基于IPMA 测定PCV2 的TCID50 结果第35页
     ·理化特性鉴定结果第35-39页
     ·病毒的形态学观察第39-40页
   ·多重PCR 实验结果第40-45页
     ·单相PCR 扩增第40页
     ·多重PCR 反应条件的确定第40-42页
     ·多重PCR 特异性第42-43页
     ·重复性试验第43页
     ·酶切鉴定结果第43-44页
     ·PCR 产物测序结果第44-45页
   ·正向乳胶凝集实验结果第45-47页
     ·最佳致敏浓度的选择第45-46页
     ·最佳致敏温度的确定第46页
     ·最佳致敏时间的确定第46页
     ·血清致敏乳胶的稳定性检验第46-47页
     ·乳胶凝集抗原质量的鉴定结果第47页
   ·反向乳胶凝集实验结果第47-49页
     ·致敏乳胶最佳浓度的选择第47-48页
     ·最佳致敏温度和最佳致敏时间的确定第48页
     ·血清致敏乳胶的稳定性检验第48页
     ·乳胶凝集抗原质量的鉴定结果第48-49页
4 讨论第49-51页
5 结论第51-52页
参考文献第52-59页
作者简介第59-60页
在读期间发表的论文第60-61页
致谢第61页

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