| 致谢 | 第1-12页 |
| 中文摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 引言 | 第17-20页 |
| 文献综述 鸡传染性法氏囊病毒及细胞受体研究现状 | 第20-38页 |
| 1 鸡传染性法氏囊病毒研究进展 | 第20-29页 |
| ·IBDV的基本特性 | 第20-21页 |
| ·IBDV的基因组结构、组成蛋白及功能 | 第21-23页 |
| ·IBDV在细胞中的增殖 | 第23-25页 |
| ·IBDV疫苗与免疫 | 第25-26页 |
| ·IBDV细胞受体的研究进展 | 第26-29页 |
| 2 病毒细胞受体研究进展 | 第29-38页 |
| ·病毒受体研究意义 | 第29页 |
| ·病毒受体的成分和特点 | 第29-30页 |
| ·病毒与受体的关系 | 第30-31页 |
| ·病毒受体的研究方法 | 第31-36页 |
| ·动物病毒受体应用的研究 | 第36-38页 |
| 第一章 鸡胚成纤维细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建 | 第38-51页 |
| 1 材料与方法 | 第38-45页 |
| ·材料、质粒和菌株 | 第38-39页 |
| ·CEF细胞mRNA的提取 | 第39-40页 |
| ·双链cDNA合成 | 第40-43页 |
| ·cDNA克隆到T7噬菌体载体及体外包装 | 第43-44页 |
| ·原始文库滴度的测定 | 第44页 |
| ·重组子的鉴定 | 第44-45页 |
| ·文库的扩增及滴度测定 | 第45页 |
| ·扩增后文库质量的鉴定 | 第45页 |
| 2 结果 | 第45-48页 |
| ·CEF mRNA的提取与分离 | 第45-46页 |
| ·双链cDNA的鉴定及分级分离 | 第46-47页 |
| ·初始文库滴度的测定和重组子鉴定 | 第47-48页 |
| ·扩增文库的滴度测定及插入片段大小分析 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| ·cDNA文库是发现新基因重要工具 | 第48页 |
| ·cDNA文库的构建方法 | 第48-49页 |
| ·分级分离去除小片段cDNA | 第49页 |
| ·CEF cDNA T7噬菌体文库的质量评价 | 第49-50页 |
| 4 小结 | 第50-51页 |
| 第二章 鸡胚成纤维细胞cDNA真核表达文库的构建及鉴定 | 第51-62页 |
| 1 材料与方法 | 第52-59页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·方法 | 第52-59页 |
| 2 结果 | 第59-60页 |
| ·CEF mRNA的提取 | 第59页 |
| ·初始文库的容量大小和插入片段大小的分析 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 4.小结 | 第61-62页 |
| 第三章 高效电转化感受态细胞的制备条件的优化 | 第62-70页 |
| 1 材料与方法 | 第62-65页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·优化方法步骤 | 第63-65页 |
| 2 结果 | 第65-67页 |
| ·生长阶段和细胞重悬体积优化 | 第65-66页 |
| ·电场强度的优化 | 第66页 |
| ·DTT和DL-threonine等化学试剂对转化效率的影响 | 第66页 |
| ·优化的最佳制备方案 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-68页 |
| 4 小结 | 第68-70页 |
| 第四章 筛选阻断IBDV感染CEF单克隆抗体方法的建立 | 第70-82页 |
| 1 材料 | 第71页 |
| ·细胞和病毒 | 第71页 |
| ·培养基及其它试剂 | 第71页 |
| 2 方法 | 第71-74页 |
| ·鸡胚成纤维细胞(CEF)的制备 | 第71页 |
| ·病毒的感染、收获与毒力测定 | 第71-72页 |
| ·病毒感染比(MOI)的测定 | 第72页 |
| ·IBDV病毒TCID_(50)的测定 | 第72-73页 |
| ·免疫组化实验中IBDV接毒量和感染时间的优化 | 第73页 |
| ·抗IBDV的单抗(F22EA6)的纯化和Biotin标记 | 第73页 |
| ·生物素标记的抗IBDV单抗(F22EA6-Biotin)工作浓度的优化 | 第73-74页 |
| ·阻断感染筛选系统特异性评价 | 第74页 |
| 3 结果 | 第74-80页 |
| ·收获病毒抗原的测定 | 第74-75页 |
| ·IBDV感染比(MOI)的测定 | 第75页 |
| ·IBDV病毒TCID_(50)的测定 | 第75-76页 |
| ·免疫组化实验中IBDV接毒量和接毒时间的优化 | 第76-77页 |
| ·抗IBDV单抗F22EA6的纯化和生物素Biotin标记 | 第77页 |
| ·生物素标记的IBDV单抗(F22EA6-Biotin)在免疫组化中的工作浓度确定 | 第77-78页 |
| ·阻断感染筛选系统的特异性评价 | 第78页 |
| ·阻断IBDV感染CEF的单克隆抗体筛选的方法 | 第78-80页 |
| 4 讨论 | 第80-81页 |
| 5 小结 | 第81-82页 |
| 第五章 阻断IBDV感染CEF的单克隆抗体的制备及功能鉴定 | 第82-93页 |
| 1 材料 | 第83-84页 |
| ·细胞和病毒 | 第83页 |
| ·培养基及其它试剂 | 第83页 |
| ·制备单克隆抗体所需其他溶液 | 第83-84页 |
| ·实验动物Balb/C小鼠 | 第84页 |
| 2 方法 | 第84-88页 |
| ·免疫原的制备和免疫方法 | 第84-85页 |
| ·总抗体效价和阻断IBDV感染的效果测定与比较 | 第85页 |
| ·阻断IBDV感染的mAb杂交瘤细胞株的建立 | 第85-87页 |
| ·阻断IBDV感染的单克隆抗体的制备 | 第87页 |
| ·上清梯度稀释后的阻断实验 | 第87页 |
| ·用该mAb对CEF进行免疫组化染色 | 第87-88页 |
| ·流式细胞仪检测mAb与CEF表面分子的结合 | 第88页 |
| 3 结果 | 第88-91页 |
| ·总抗体效价和阻断IBDV感染的效率测定与比较 | 第88-89页 |
| ·阻断IBDV感染的mAb杂交瘤细胞株的筛选 | 第89页 |
| ·单抗38-1株上清梯度稀释后阻断感染实验 | 第89-90页 |
| ·用该mAb对CEF进行表面染色 | 第90页 |
| ·流式细胞仪检测抗体与CEF表面分子的结合 | 第90-91页 |
| 4 讨论 | 第91-92页 |
| 5 小结 | 第92-93页 |
| 研究总结 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-110页 |
| 附录 | 第110-116页 |
| 附录A 缩略词表 | 第110-115页 |
| 附录B 攻博期间参研项目与发表论文、著作 | 第115-116页 |
