| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| ·脂肪酶的研究现状 | 第12-18页 |
| ·脂肪酶的来源 | 第12-13页 |
| ·脂肪酶催化的反应类型 | 第13页 |
| ·脂肪酶的催化机理 | 第13-14页 |
| ·底物特异性 | 第14-15页 |
| ·脂肪酶活力的测定 | 第15-16页 |
| ·脂肪酶的应用 | 第16-18页 |
| ·食品工业中的应用 | 第17页 |
| ·医药和化妆品 | 第17页 |
| ·洗涤剂工业中的应用 | 第17页 |
| ·手性化合物制药中的应用 | 第17-18页 |
| ·酶法催化拆分A-苯乙醇的研究进展 | 第18-24页 |
| ·手性研究的意义 | 第18-20页 |
| ·拆分方法的研究概况 | 第20-22页 |
| ·酶法拆分法 | 第20页 |
| ·色谱拆分法(手性色谱分离) | 第20-21页 |
| ·化学拆分法 | 第21页 |
| ·结晶拆分法 | 第21-22页 |
| ·膜拆分法 | 第22页 |
| ·α-苯乙醇的拆分 | 第22-23页 |
| ·α-苯乙醇的性质 | 第22页 |
| ·脂肪酶在手性拆分应用中的简介 | 第22-23页 |
| ·脂肪酶在α-苯乙醇手性拆分中的应用 | 第23-24页 |
| ·微生物法 | 第23页 |
| ·酶法 | 第23-24页 |
| ·产热稳定性脂肪酶地细菌的相关研究 | 第24-26页 |
| ·地细菌菌属 | 第24-25页 |
| ·Geobacillus菌属组成及其特征 | 第25页 |
| ·Geobacillus菌属的生态分布 | 第25页 |
| ·Geobacillus来源脂肪酶基因的克隆和表达 | 第25-26页 |
| ·本课题的立题依据和研究内容 | 第26-28页 |
| ·立题依据 | 第26-27页 |
| ·研究内容 | 第27-28页 |
| 第二章 嗜热脂肪芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆和表达 | 第28-47页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·菌种、载体、试剂 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-39页 |
| ·Geobacillus stearothermophilus JC基因组DNA的制备 | 第29-30页 |
| ·重组表达质粒构建策略 | 第30-31页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第31-32页 |
| ·TA克隆 | 第32-34页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第34-36页 |
| ·脂肪酶的表达 | 第36-37页 |
| ·表达产物SDS-PAGE分析 | 第37页 |
| ·脂肪酶活力测定 | 第37-38页 |
| ·原理 | 第37页 |
| ·底物溶液和缓冲液的配制 | 第37页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第37-38页 |
| ·酶反应的进行 | 第38页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第38-39页 |
| ·原理 | 第38页 |
| ·操作步骤 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-44页 |
| ·基因组DNA的获得 | 第39页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第39-41页 |
| ·TA克隆 | 第41页 |
| ·重组表达载体pET28a-LIP1和pET28a-LIP2的鉴定 | 第41-42页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 脂肪酶JC的分离纯化及酶学性质研究 | 第47-62页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·主要试剂 | 第47页 |
| ·主要溶液与缓冲液 | 第47-48页 |
| ·实验菌株 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-52页 |
| ·Ni~+柱亲和层析纯化重组目的蛋白 | 第48页 |
| ·脂肪酶JC的酶学性质研究 | 第48-52页 |
| ·pH对酶活力的影响 | 第48-49页 |
| ·温度对酶活力的影响及热稳定性 | 第49页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第49页 |
| ·抑制剂和表面活性剂对酶活的影响 | 第49页 |
| ·有机溶剂对酶活的影响 | 第49页 |
| ·底物特异性 | 第49-50页 |
| ·动力学常数的测定 | 第50-52页 |
| ·实验结果 | 第52-59页 |
| ·脂肪酶的分离纯化 | 第52-53页 |
| ·脂肪酶JC酶学性质研究 | 第53-59页 |
| ·pH对脂肪酶JC活性的影响 | 第53-55页 |
| ·温度对脂肪酶JC活性的影响和酶热稳定性 | 第55页 |
| ·金属离子对脂肪酶JC活性的影响 | 第55-56页 |
| ·抑制剂和表面活性剂对脂肪酶JC活性的影响 | 第56-57页 |
| ·有机溶剂对脂肪酶JC活性的影响 | 第57页 |
| ·脂肪酶对不同碳链长度对硝基苯酚酯的底物特异性 | 第57-58页 |
| ·动力学常数的测定 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-62页 |
| 第四章 脂肪酶JC催化拆分外消旋乙酸苯乙酯的研究 | 第62-69页 |
| ·材料与方法 | 第62-65页 |
| ·菌种 | 第62页 |
| ·实验主要仪器 | 第62-63页 |
| ·实验试剂 | 第63页 |
| ·拆分反应 | 第63页 |
| ·分析方法 | 第63-65页 |
| ·拆分过程中一些参量的计算 | 第65页 |
| ·结果与讨论 | 第65-67页 |
| ·拆分前后的液相色谱图 | 第65-67页 |
| ·拆分结果的计算 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第五章 结论与建议 | 第69-71页 |
| ·结论 | 第69-70页 |
| ·建议 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-78页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
