| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-33页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌(APP)及其危害 | 第12-18页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的发现史 | 第12页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的特征 | 第12-13页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的毒力 | 第13-17页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的危害 | 第17-18页 |
| ·细菌内生质粒的基本特征 | 第18-28页 |
| ·质粒的类型 | 第19-20页 |
| ·质粒的复制方式 | 第20-23页 |
| ·质粒的拷贝数和拷贝数的控制 | 第23-26页 |
| ·质粒拷贝数的测定 | 第26页 |
| ·质粒的不相容性 | 第26-27页 |
| ·质粒的不稳定性 | 第27-28页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌的内生质粒 | 第28-29页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌突变体构建方法 | 第29-30页 |
| ·自然突变 | 第29页 |
| ·化学诱变 | 第29页 |
| ·转座子突变 | 第29-30页 |
| ·同源重组 | 第30页 |
| ·PCR定向突变系统的研究进展 | 第30-33页 |
| ·PCR定向突变系统的组成 | 第31页 |
| ·PCR定向突变系统的发展 | 第31-32页 |
| ·PCR定向突变系统的优点 | 第32-33页 |
| 第2章 胸膜肺炎放线杆菌内生质粒的研究 | 第33-61页 |
| ·研究目的和意义 | 第33页 |
| ·实验材料 | 第33-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第33-34页 |
| ·寡核甘酸引物 | 第34-35页 |
| ·培养基和抗生素 | 第35页 |
| ·主要酶以及试剂盒来源 | 第35页 |
| ·使用溶液及储存液 | 第35-36页 |
| ·蛋白质纯化缓冲液 | 第36-37页 |
| ·电泳迁移实验缓冲液 | 第37页 |
| ·其他试剂 | 第37-38页 |
| ·主要实验仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-46页 |
| ·APP药敏实验 | 第38页 |
| ·抗菌药物最低抑菌浓度(MIC) | 第38-39页 |
| ·DNA的操作 | 第39-40页 |
| ·RNA的操作 | 第40-41页 |
| ·质粒的转化及转化子的鉴定 | 第41-42页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌内生质粒序列拼接、测序和注释 | 第42-43页 |
| ·质粒拷贝数的鉴定 | 第43页 |
| ·质粒稳定性研究 | 第43页 |
| ·质粒消除菌株的筛选 | 第43-44页 |
| ·蛋白质操作 | 第44-46页 |
| ·结果和分析 | 第46-58页 |
| ·APP的抗药性分析和APP质粒的提取 | 第46-48页 |
| ·质粒pHB0503的拼接和测序 | 第48-49页 |
| ·内生质粒pHB0503的概述 | 第49-50页 |
| ·内生质粒pHB0503序列的分析 | 第50-53页 |
| ·内生质粒pHB0503的抗性基因来源和共转录分析 | 第53-55页 |
| ·内生质粒pHB0503拷贝数和稳定性 | 第55-57页 |
| ·质粒pHB0503的复制蛋白的分析 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-59页 |
| ·胸膜肺炎放线杆菌耐药性 | 第58-59页 |
| ·pHB0503抗性基因簇的来源 | 第59页 |
| ·质粒pHB0503的稳定性 | 第59页 |
| ·pHB0503复制蛋白和EMSA | 第59页 |
| ·结论与展望 | 第59-61页 |
| 第3章 胸膜肺炎放线杆菌温敏复制型质粒的研究 | 第61-72页 |
| ·研究目的和意义 | 第61页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·菌株和质粒 | 第61-62页 |
| ·寡核甘酸引物 | 第62页 |
| ·培养基 | 第62页 |
| ·主要试剂 | 第62-63页 |
| ·实验方法 | 第63-65页 |
| ·细菌PCR模板制备 | 第63-64页 |
| ·PCR扩增 | 第64页 |
| ·质粒的转化及转化子的鉴定 | 第64页 |
| ·复制原点突变体库的建立 | 第64页 |
| ·APP的质粒提取 | 第64页 |
| ·温敏型载体的筛选 | 第64-65页 |
| ·质粒的稳定性 | 第65页 |
| ·实验结果和分析 | 第65-70页 |
| ·pMIDG301复制原点预测、克隆和验证 | 第65-68页 |
| ·用低保真Taq DNA聚合酶扩增法筛选温敏型穿梭载体 | 第68-69页 |
| ·用修复系统缺陷型菌株(XL1-RED)筛选温敏型穿梭载体 | 第69-70页 |
| ·讨论 | 第70-71页 |
| ·pMIDG301的复制区域的分析和验证 | 第70页 |
| ·筛选温敏型穿梭载体 | 第70-71页 |
| ·结论和展望 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 附录 | 第86页 |
