| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-22页 |
| ·血栓性疾病及治疗方式 | 第10页 |
| ·纤溶酶类溶栓剂应用状况 | 第10-11页 |
| ·纤溶酶类溶栓剂研究开发状况 | 第11-14页 |
| ·重组t-PA的突变体等第三代溶栓制剂 | 第11页 |
| ·动物来源纤溶酶 | 第11-12页 |
| ·植物来源纤溶酶 | 第12页 |
| ·海洋生物来源纤溶酶 | 第12-13页 |
| ·微生物来源纤溶酶 | 第13-14页 |
| ·抗血栓药研究动向 | 第14页 |
| ·华根霉纤溶酶的研究进展 | 第14-16页 |
| ·华根霉的发酵研究 | 第15页 |
| ·华根霉纤溶酶的急性毒性及药效学研究 | 第15页 |
| ·华根霉纤溶酶的研究目标 | 第15-16页 |
| ·cDNA文库技术 | 第16-19页 |
| ·cDNA文库的种类 | 第16-18页 |
| ·全长cDNA文库构建方法 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第19-20页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的进展 | 第19页 |
| ·毕赤酵母表达系统的优越性 | 第19-20页 |
| ·表达载体 | 第20页 |
| ·毕赤酵母表达宿主菌 | 第20页 |
| ·影响外源蛋白高效表达的因素 | 第20页 |
| ·本课题研究的主要内容、目的及意义 | 第20-22页 |
| ·本课题研究的主要内容 | 第20-21页 |
| ·本课题研究的意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-39页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·菌种与质粒 | 第22页 |
| ·试剂盒及工具酶 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| ·培养基和溶液 | 第23-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-39页 |
| ·华根霉cDNA文库的构建 | 第26-31页 |
| ·文库的滴度测定 | 第31页 |
| ·PCR法筛选根霉纤溶酶基因 | 第31-34页 |
| ·纤溶酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第34-37页 |
| ·重组纤溶酶的纯化 | 第37页 |
| ·重组纤溶酶酶学性质研究 | 第37-39页 |
| 3 结果与讨论 | 第39-61页 |
| ·华根霉cDNA文库的构建 | 第39-44页 |
| ·总RNA的提取和分离mRNA | 第39页 |
| ·双链cDNA的合成和鉴定 | 第39页 |
| ·ds cDNA片段的酶切和分级分离 | 第39-41页 |
| ·cDNA和载体连接并转化大肠杆菌 | 第41页 |
| ·cDNA文库的滴度 | 第41-42页 |
| ·文库的重组率和PCR鉴定 | 第42-44页 |
| ·PCR法筛选根霉纤溶酶基因 | 第44-46页 |
| ·测序结果 | 第44-45页 |
| ·序列比对 | 第45-46页 |
| ·根霉纤溶酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第46-52页 |
| ·毕赤酵母表达质粒pPIC9 | 第46页 |
| ·根霉纤溶酶成熟肽基因的获得 | 第46页 |
| ·表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·转化大肠杆菌及重组子的鉴定 | 第48页 |
| ·表达载体的线性化 | 第48页 |
| ·酵母转化子表型的鉴定 | 第48-49页 |
| ·巴斯德毕赤酵母转化子PCR法鉴定 | 第49-50页 |
| ·目的基因产物SDS-PAGE检测 | 第50-51页 |
| ·纤溶酶活性测定 | 第51-52页 |
| ·纤溶酶的分离纯化 | 第52-54页 |
| ·盐析 | 第52-53页 |
| ·透析袋脱盐 | 第53页 |
| ·超滤分离后的50 KDa以下蛋白组分的高效液相色谱图 | 第53-54页 |
| ·SDS-PAGE检测纯化后蛋白 | 第54页 |
| ·纤溶酶的酶学性质鉴定 | 第54-61页 |
| ·重组纤溶酶的等电点预测 | 第54-55页 |
| ·重组纤溶酶的最适作用温度和热稳定性 | 第55-56页 |
| ·纤溶酶的最适作用pH和pH稳定性 | 第56-58页 |
| ·纤溶酶的底物作用专一性 | 第58-59页 |
| ·金属离子对纤溶酶活性的影响 | 第59-61页 |
| 4 结论 | 第61-62页 |
| 5 展望 | 第62-63页 |
| 6 参考文献 | 第63-69页 |
| 7 硕士期间论文发表情况 | 第69-70页 |
| 8 致谢 | 第70页 |