摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-10页 |
第一章 文献综述 | 第10-24页 |
·乳脂肪的研究进展 | 第10-11页 |
·乳脂肪的结构和功能 | 第10页 |
·乳脂肪球的分泌特点 | 第10-11页 |
·嗜乳脂蛋白基因及其研究进展 | 第11-14页 |
·BTN1A1 蛋白的结构 | 第11-13页 |
·BTN1A1 基因的研究进展 | 第13-14页 |
·腺病毒及其载体研究进展 | 第14-23页 |
·腺病毒的一般生物学特性 | 第14-15页 |
·腺病毒载体的构建 | 第15-21页 |
·腺病毒载体的优越性 | 第21-22页 |
·腺病毒载体的应用 | 第22-23页 |
·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
第二章 BTN 特异RNAi 序列筛选及腺病毒载体的构建和鉴定 | 第24-40页 |
·材料与方法 | 第24-32页 |
·材料 | 第24-25页 |
·编码目的shRNA 的单链DNA 寡核苷酸片段的设计、合成 | 第25-26页 |
·pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体的构建 | 第26-27页 |
·pDsRed1-C1-BTN 载体的构建 | 第27-28页 |
·shRNA 有效序列的筛选 | 第28-30页 |
·pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA 重组腺病毒载体的构建及鉴定 | 第30-31页 |
·腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第31-32页 |
·结果 | 第32-36页 |
·pRNTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体的构建 | 第32页 |
·pDsRed1-C1-BTN 载体的构建 | 第32-33页 |
·shRNA 序列的筛选 | 第33-34页 |
·重组腺病毒载体的构建及鉴定 | 第34-35页 |
·腺病毒的包装、扩增及滴度测定 | 第35-36页 |
·讨论 | 第36-40页 |
·关于shRNA 的设计问题 | 第36-37页 |
·关于腺病毒系统的问题 | 第37-38页 |
·腺病毒操作中的几个重要环节 | 第38-40页 |
第三章 腺病毒感染乳腺上皮细胞后对细胞中相关基因以及脂肪酸含量的影响 | 第40-56页 |
·材料与方法 | 第40-48页 |
·材料 | 第40-41页 |
·最佳MOI(Multiplicity Of Infection)的确定 | 第41页 |
·嗜乳脂蛋白基因RNA 干扰效率的检测 | 第41-48页 |
·结果与分析 | 第48-53页 |
·腺病毒介导的shRNA 感染乳腺上皮细胞最佳MOI 的确定 | 第48页 |
·总RNA 的提取及检测 | 第48-49页 |
·实时定量PCR 检测差异表达基因 | 第49-51页 |
·Western blotting 检测嗜乳脂蛋白基因的蛋白表达 | 第51-52页 |
·腺病毒对细胞内脂肪酸代谢的影响 | 第52-53页 |
·讨论 | 第53-56页 |
·关于实时定量PCR 条件的优化 | 第53-54页 |
·关于BTN 调控奶山羊乳腺上皮细胞中脂肪酸代谢的问题 | 第54页 |
·关于BTN 与脂肪酸代谢相关基因关系的问题 | 第54-56页 |
结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-64页 |
致谢 | 第64-65页 |
作者简介 | 第65页 |