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腺病毒介导的shRNA抑制奶山羊乳腺上皮细胞嗜乳脂蛋白基因表达的研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-10页
第一章 文献综述第10-24页
   ·乳脂肪的研究进展第10-11页
     ·乳脂肪的结构和功能第10页
     ·乳脂肪球的分泌特点第10-11页
   ·嗜乳脂蛋白基因及其研究进展第11-14页
     ·BTN1A1 蛋白的结构第11-13页
     ·BTN1A1 基因的研究进展第13-14页
   ·腺病毒及其载体研究进展第14-23页
     ·腺病毒的一般生物学特性第14-15页
     ·腺病毒载体的构建第15-21页
     ·腺病毒载体的优越性第21-22页
     ·腺病毒载体的应用第22-23页
   ·本研究的目的和意义第23-24页
第二章 BTN 特异RNAi 序列筛选及腺病毒载体的构建和鉴定第24-40页
   ·材料与方法第24-32页
     ·材料第24-25页
     ·编码目的shRNA 的单链DNA 寡核苷酸片段的设计、合成第25-26页
     ·pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体的构建第26-27页
     ·pDsRed1-C1-BTN 载体的构建第27-28页
     ·shRNA 有效序列的筛选第28-30页
     ·pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA 重组腺病毒载体的构建及鉴定第30-31页
     ·腺病毒的包装、扩增及滴度测定第31-32页
   ·结果第32-36页
     ·pRNTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体的构建第32页
     ·pDsRed1-C1-BTN 载体的构建第32-33页
     ·shRNA 序列的筛选第33-34页
     ·重组腺病毒载体的构建及鉴定第34-35页
     ·腺病毒的包装、扩增及滴度测定第35-36页
   ·讨论第36-40页
     ·关于shRNA 的设计问题第36-37页
     ·关于腺病毒系统的问题第37-38页
     ·腺病毒操作中的几个重要环节第38-40页
第三章 腺病毒感染乳腺上皮细胞后对细胞中相关基因以及脂肪酸含量的影响第40-56页
   ·材料与方法第40-48页
     ·材料第40-41页
     ·最佳MOI(Multiplicity Of Infection)的确定第41页
     ·嗜乳脂蛋白基因RNA 干扰效率的检测第41-48页
   ·结果与分析第48-53页
     ·腺病毒介导的shRNA 感染乳腺上皮细胞最佳MOI 的确定第48页
     ·总RNA 的提取及检测第48-49页
     ·实时定量PCR 检测差异表达基因第49-51页
     ·Western blotting 检测嗜乳脂蛋白基因的蛋白表达第51-52页
     ·腺病毒对细胞内脂肪酸代谢的影响第52-53页
   ·讨论第53-56页
     ·关于实时定量PCR 条件的优化第53-54页
     ·关于BTN 调控奶山羊乳腺上皮细胞中脂肪酸代谢的问题第54页
     ·关于BTN 与脂肪酸代谢相关基因关系的问题第54-56页
结论第56-57页
参考文献第57-64页
致谢第64-65页
作者简介第65页

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