摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-12页 |
第一章 文献综述 | 第12-25页 |
·脂肪酸合酶(FAS)的研究进展 | 第12-17页 |
·脂肪酸合酶的概念及功能 | 第12-14页 |
·脂肪酸合酶基因的研究进展 | 第14-15页 |
·脂肪酸合酶的应用意义 | 第15-16页 |
·脂肪酸合酶的启动子研究 | 第16-17页 |
·启动子克隆方法研究进展 | 第17-21页 |
·利用启动子探针载体筛选启动子 | 第17-18页 |
·利用PCR 技术克隆启动子 | 第18-20页 |
·启动子结构和功能的研究方法 | 第20-21页 |
·生物信息学分析进展 | 第21-22页 |
·雌激素与相关基因转录 | 第22-23页 |
·本研究的目的与意义 | 第23-25页 |
第二章 西农萨能奶山羊脂肪酸合酶(FAS)基因启动子序列全长的克隆与生物信息学分析 | 第25-34页 |
·材料与方法 | 第25-30页 |
·样品采集 | 第25-26页 |
·主要试剂 | 第26页 |
·引物设计与合成 | 第26页 |
·西农萨能羊全血DNA 的提取 | 第26-27页 |
·FAS 启动子的PCR 扩增 | 第27页 |
·目的基因片段的纯化 | 第27-28页 |
·目的基因的连接和转化 | 第28页 |
·阳性克隆产物的鉴定 | 第28-30页 |
·序列分析 | 第30页 |
·结果与分析 | 第30-33页 |
·FAS 基因启动子序列的克隆 | 第30-32页 |
·FAS 基因启动子序列分析 | 第32-33页 |
·讨论 | 第33页 |
·小结 | 第33-34页 |
第三章 西农萨能羊脂肪酸合酶(FAS)基因启动子缺失片段载体的构建与启动活性检测 | 第34-44页 |
·材料和方法 | 第34-41页 |
·样品采集 | 第34页 |
·主要试剂 | 第34页 |
·引物设计与合成 | 第34-35页 |
·启动子缺失片段克隆载体的构建 | 第35-36页 |
·启动子缺失片段荧光素酶表达载体的构建 | 第36-37页 |
·启动子缺失片段荧光素酶表达载体的纯化 | 第37-38页 |
·pSV-β-半乳糖苷酶对照载体的扩增及纯化 | 第38页 |
·293、MCF-7 细胞的培养 | 第38-39页 |
·PGL-3 重组质粒系列与pSV -β-半乳糖苷酶对照质粒共转染293、MCF-7 细胞 | 第39-40页 |
·荧光素酶报告基因活性检测 | 第40页 |
·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第40-41页 |
·结果与分析 | 第41-43页 |
·西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因启动子缺失片段克隆载体的构建 | 第41-42页 |
·西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因启动子缺失片段 PGL-3 表达载体的构建 | 第42页 |
·西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因启动子的活性分析 | 第42-43页 |
·讨论 | 第43页 |
·小结 | 第43-44页 |
第四章 雌激素对西农萨能羊脂肪酸合酶(FAS)启动子活性中心的作用影响研究 | 第44-49页 |
·材料和方法 | 第44-46页 |
·启动子活性中心序列克隆载体的构建 | 第44-45页 |
·启动子活性中心序列荧光素酶表达载体的构建与纯化 | 第45页 |
·pSV -β-半乳糖苷酶对照载体的扩增及纯化 | 第45页 |
·293、MCF-7 细胞的培养 | 第45页 |
·浓度梯度雌激素的配制 | 第45页 |
·PGL-3 重组质粒系列与pSV -β-半乳糖苷酶对照质粒共转染293、MCF-7 细胞 | 第45页 |
·浓度梯度雌激素作用于293 细胞 | 第45页 |
·荧光素酶报告基因活性检测 | 第45页 |
·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第45-46页 |
·结果与分析 | 第46-47页 |
·西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因启动子活性中心克隆载体的构建 | 第46页 |
·西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因启动子活性中心 PGL-3 表达载体的构建 | 第46页 |
·雌激素对西农萨能奶山羊脂肪酸合酶基因启动子活性中心的影响 | 第46-47页 |
·讨论 | 第47-48页 |
·小结 | 第48-49页 |
第五章 结论 | 第49-50页 |
参考文献 | 第50-55页 |
附录 | 第55-65页 |
致谢 | 第65-66页 |
作者简介 | 第66页 |