| 学位论文数据集 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| ·豹蛙酶的研究现状 | 第11-14页 |
| ·豹蛙酶化学结构和稳定性 | 第11-12页 |
| ·豹蛙酶抗肿瘤作用机制 | 第12-13页 |
| ·豹蛙酶与其它药物的协同作用、免疫调节和抗病毒作用 | 第13-14页 |
| ·豹蛙酶的生产方法 | 第14-15页 |
| ·天然提取法 | 第14页 |
| ·基因工程方法 | 第14-15页 |
| ·重组质粒的构建 | 第15-17页 |
| ·载体的选择 | 第15页 |
| ·目标片段的克隆 | 第15-17页 |
| ·大肠杆菌表达系统简介 | 第17-23页 |
| ·以大肠杆菌为宿主基因表达的策略 | 第17页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中表达的影响因素 | 第17-19页 |
| ·选择宿主和控制培养条件 | 第19-20页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的表达模式 | 第20-23页 |
| ·重组蛋白的分离纯化技术 | 第23-27页 |
| ·层析方法的选择 | 第23-24页 |
| ·离子交换层析 | 第24页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第24-25页 |
| ·其他方法 | 第25-27页 |
| 第二章 豹蛙酶基因的克隆 | 第27-39页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·实验材料与仪器 | 第27-28页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·菌种与质粒 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·试剂 | 第28页 |
| ·实验仪器 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-33页 |
| ·引物设计及合成 | 第28-29页 |
| ·PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·反应体系 | 第29-30页 |
| ·扩增程序 | 第30页 |
| ·PCR产物回收(试剂盒) | 第30-31页 |
| ·连接 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第31页 |
| ·转化 | 第31-32页 |
| ·质粒提取(碱裂解法) | 第32页 |
| ·酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·基因测序鉴定 | 第33页 |
| ·表达载体pET-22b-onconase的构建 | 第33页 |
| ·结果分析与讨论 | 第33-38页 |
| ·PCR产物琼脂糖凝胶电泳 | 第33-34页 |
| ·PCR鉴定 | 第34-35页 |
| ·测序鉴定 | 第35-36页 |
| ·表达载体pET-22b-onconase的构建 | 第36-38页 |
| ·表达载体pET-22b-onconase构建图谱 | 第36-37页 |
| ·克隆及表达载体酶切产物琼脂糖凝胶电泳 | 第37-38页 |
| ·本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 重组豹蛙酶基因工程菌培养条件的优化 | 第39-53页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·试验材料与仪器 | 第39-41页 |
| ·试验材料 | 第39-40页 |
| ·菌种 | 第39-40页 |
| ·培养基与试剂 | 第40页 |
| ·实验仪器 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-42页 |
| ·菌种活化 | 第41页 |
| ·菌种培养 | 第41页 |
| ·不同菌种的选择 | 第41-42页 |
| ·发酵过程各因素的影响 | 第42-43页 |
| ·培养时间 | 第42页 |
| ·诱导条件 | 第42-43页 |
| ·诱导温度 | 第42页 |
| ·诱导时间 | 第42页 |
| ·诱导剂浓度 | 第42-43页 |
| ·氨苄青霉素浓度 | 第43页 |
| ·分析方法 | 第43页 |
| ·菌体浓度的测定 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE分析目标蛋白表达量 | 第43页 |
| ·结果与讨论 | 第43-51页 |
| ·不同菌种融合蛋白表达分析 | 第43-44页 |
| ·基因工程菌的生长 | 第44-45页 |
| ·不同诱导条件对融合蛋白表达量的影响 | 第45-51页 |
| ·不同诱导温度对融合蛋白表达量的影响 | 第45-47页 |
| ·不同诱导时间对融合蛋白表达量的影响 | 第47-48页 |
| ·IPTG浓度对融合蛋白表达量的影响 | 第48-49页 |
| ·氨苄青霉素浓度对融合蛋白表达量的影响 | 第49-51页 |
| ·小结 | 第51-53页 |
| 第四章 重组豹蛙酶的分离纯化 | 第53-65页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·实验材料和仪器 | 第53-54页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·实验仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-58页 |
| ·重组豹蛙酶在大肠杆菌Rosetta(DE3)内的分布 | 第54-56页 |
| ·细胞总蛋白(TCP)组分 | 第54-55页 |
| ·培养基组分 | 第55页 |
| ·细胞周质组分 | 第55-56页 |
| ·细胞质可溶部分组分 | 第56页 |
| ·细胞质不溶组分 | 第56页 |
| ·重组豹蛙酶的分离纯化 | 第56-58页 |
| ·包涵体的提取 | 第56-57页 |
| ·包涵体的变性与复性 | 第57页 |
| ·柱层析与酶切 | 第57-58页 |
| ·LC-ESI-MS/MS鉴定豹蛙酶 | 第58页 |
| ·分析方法 | 第58-59页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第58页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第58-59页 |
| ·豹蛙酶活性的测定 | 第59页 |
| ·结果与分析 | 第59-64页 |
| ·重组豹蛙酶在菌体中的分布 | 第59-61页 |
| ·重组豹蛙酶的分离纯化 | 第61页 |
| ·重组豹蛙酶的活性鉴定 | 第61-62页 |
| ·LC-ESI-MS/MS鉴定豹蛙酶 | 第62-64页 |
| ·小结 | 第64-65页 |
| 第五章 结论与建议 | 第65-67页 |
| ·结论 | 第65-66页 |
| ·建议 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第76-77页 |
| 作者和导师简介 | 第77-78页 |
| 北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第78-79页 |
