| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-26页 |
| ·β-内酰胺类抗生素与头孢菌素类抗生素 | 第18-22页 |
| ·β-内酰胺类抗生素的发展 | 第18页 |
| ·头孢菌素类抗生素 | 第18-19页 |
| ·头孢菌素C | 第19页 |
| ·头孢菌素C的生产菌 | 第19页 |
| ·头孢菌素C的生物合成 | 第19-21页 |
| ·乙酰转移酶编码基因cefG | 第21-22页 |
| ·酶联免疫分析技术 | 第22-24页 |
| ·酶联免疫分析特点 | 第22页 |
| ·常用酶联免疫分析方法 | 第22-23页 |
| ·光度酶联免疫分析方法 | 第23-24页 |
| ·论文的目的与意义 | 第24页 |
| ·论文的目的 | 第24页 |
| ·论文的创新点 | 第24页 |
| ·论文的研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 材料、试剂与方法 | 第26-30页 |
| ·材料与试剂 | 第26-29页 |
| ·质粒 | 第26页 |
| ·菌株 | 第26-27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·抗生素 | 第28页 |
| ·工具酶 | 第28-29页 |
| ·试剂盒与试剂 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29页 |
| ·专业软件 | 第29-30页 |
| 第三章 产黄头孢霉cefG基因序列的获得 | 第30-44页 |
| ·材料与方法 | 第30-38页 |
| ·质粒与菌株 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·酶与试剂、试剂盒 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-38页 |
| ·实验结果与讨论 | 第38-43页 |
| ·产黄顶头孢霉总基因组的提取 | 第38-39页 |
| ·cefG基因的引物设计和克隆 | 第39页 |
| ·cefG基因的Assembly PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·克隆质粒pUCK-cefG的构建 | 第40-41页 |
| ·质粒快速鉴定验证阳性克隆 | 第41页 |
| ·菌落PCR验证阳性克隆 | 第41-42页 |
| ·提取质粒并酶切验证 | 第42页 |
| ·定点突变 | 第42-43页 |
| ·竞争性PCR验证突变 | 第43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 cefG大肠杆菌表达体系的建立 | 第44-50页 |
| ·材料与方法 | 第44-46页 |
| ·质粒与菌株 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·酶与试剂 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-46页 |
| ·实验结果与讨论 | 第46-48页 |
| ·cefG-EH序列的得到 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pET30-cefG的构建结果 | 第47页 |
| ·乙酰转移酶的表达结果 | 第47-48页 |
| ·本章小结 | 第48-50页 |
| 第五章 乙酰转移酶的抗体制备及检测 | 第50-56页 |
| ·材料与方法 | 第50-52页 |
| ·质粒与菌株 | 第50页 |
| ·培养基 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·实验结果与讨论 | 第52-55页 |
| ·乙酰转移酶包涵体的制备 | 第52页 |
| ·多克隆抗体效价检测 | 第52-53页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第53-54页 |
| ·抗体检测效果评价 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 第六章 cefG真核表达体系的建立 | 第56-60页 |
| ·材料与方法 | 第56-58页 |
| ·质粒与菌株 | 第56-57页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·酶与试剂 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-58页 |
| ·实验结果与讨论 | 第58-59页 |
| ·真核表达质粒pDH25-cefG的构建 | 第58-59页 |
| ·产黄头孢霉原生质体对潮霉素B敏感性的研究 | 第59页 |
| ·质粒pDH25转化产黄头孢霉原生质体条件摸索 | 第59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第七章 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 附录 | 第63-81页 |
| 附录1 实验仪器 | 第63-64页 |
| 附录2 化学试剂药品 | 第64-65页 |
| 附录3 真核生物DNA提取方法 | 第65-66页 |
| 附录4 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第66-67页 |
| 附录5 Assembly PCR原理及操作方法 | 第67-68页 |
| 附录6 感受态细胞的制备及质粒(连接产物)转化 | 第68-69页 |
| 附录7 蓝白斑法筛选阳性克隆 | 第69-70页 |
| 附录8 质粒快速鉴定法筛选重组菌株 | 第70-71页 |
| 附录9 菌落PCR | 第71-72页 |
| 附录10 定点突变 | 第72-73页 |
| 附录11 质粒小量提取方法 | 第73-74页 |
| 附录12 DNA凝胶回收纯化 | 第74-75页 |
| 附录13 蛋白SDS-PAGE凝胶电泳 | 第75-77页 |
| 附录14 考马斯亮兰法(Bradford法)测定蛋白质浓度 | 第77-78页 |
| 附录15 蛋白抗原包被的ELISA法 | 第78-80页 |
| 附录16 线性化载体的去磷酸化 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第82-83页 |
| 作者和导师简介 | 第83-84页 |
| 北京化工大学硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第84-85页 |