中文摘要 | 第1-9页 |
英文摘要(Abstract) | 第9-10页 |
1 缩略词表 | 第10-12页 |
2 前言 | 第12-26页 |
·李斯特菌概述 | 第12-13页 |
·李斯特菌的致病性 | 第13-14页 |
·李斯特菌的感染周期 | 第14页 |
·介导李斯特菌侵入非吞噬细胞的毒力蛋白-内化素家族蛋白 | 第14-15页 |
·InlB诱导的细胞信号转导 | 第15-17页 |
·Cofilin的细胞功能 | 第17-18页 |
·磷脂酶D概述 | 第18-19页 |
·哺乳动物的磷脂酶D | 第19-20页 |
·PLD的胞内定位 | 第20-21页 |
·PLD1和PLD2的调节分子 | 第21页 |
·磷脂酶D的功能 | 第21-23页 |
·本研究要解决的主要问题 | 第23-24页 |
·主要技术路线 | 第24-25页 |
·研究目的和意义 | 第25-26页 |
3 材料与方法 | 第26-40页 |
·实验材料 | 第26-32页 |
·菌株 | 第26页 |
·细胞株 | 第26页 |
·质粒及腺病毒 | 第26-27页 |
·抗体 | 第27页 |
·主要试剂及配制方法 | 第27-31页 |
·主要仪器及耗材 | 第31-32页 |
·实验方法 | 第32-40页 |
·细胞培养 | 第32页 |
·细菌培养 | 第32页 |
·重组腺病毒感染vero细胞 | 第32页 |
·在完整细胞中测定PLD活性 | 第32-33页 |
·体外侵染分析 | 第33页 |
·RNA干扰 | 第33-34页 |
·质粒DNA的大量提取 | 第34-35页 |
·vero细胞的转染 | 第35页 |
·细胞裂解 | 第35页 |
·蛋白浓度测定(Bradford法) | 第35-36页 |
·Western-Blot | 第36-37页 |
·vero细胞内的肌动蛋白骨架染色 | 第37页 |
·InlB蛋白纯化 | 第37-38页 |
·免疫荧光实验 | 第38页 |
·统计学分析 | 第38-40页 |
4 结果及讨论 | 第40-78页 |
·结果 | 第40-72页 |
·李斯特菌侵染vero细胞的基本规律 | 第40-42页 |
·李斯特菌侵染能够激活vero细胞PLD活性 | 第42-44页 |
·李斯特菌和PLD在内化侵入过程中的共定位 | 第44-45页 |
·PLD化学抑制剂能够抑制李斯特菌侵入vero细胞及李斯特菌诱导的宿主细胞PLD激活 | 第45-48页 |
·PLD缺陷型蛋白在vero细胞中的过表达抑制李斯特菌的侵染和李斯特菌诱导的宿主PLD激活 #434.1.6 vero细胞内源PLD沉默抑制李斯特菌的侵染和李斯特菌诱导的宿主PLD激活 | 第48-51页 |
·vero细胞内源PLD沉默抑制李斯特菌的侵染和李斯特菌诱导的宿主PLD激活 | 第51-53页 |
·InlB缺陷菌株不能诱导vero细胞PLD激活 | 第53-56页 |
·InlB蛋白能够直接诱导宿主PLD活性的升高 | 第56-58页 |
·InlB蛋白能够挽救InlB缺陷菌株的侵染能力和激活宿主PLD的能力 | 第58-60页 |
·InlB蛋白通过vero细胞表面的Met受体介导李斯特菌的侵入和宿主PLD的激活 | 第60-62页 |
·Cofilin磷酸化状态调节李斯特菌侵入和InlB诱导的vero细胞PLD激活 | 第62-70页 |
·PLD1的F-3片段在vero细胞中的表达能够抑制李斯特菌侵入宿主细胞和InlB诱导的PLD激活 | 第70-72页 |
·总结 | 第72-74页 |
·讨论 | 第74-78页 |
5 参考文献 | 第78-86页 |
6 在站期间发表的文章 | 第86-88页 |
7 致谢 | 第88-90页 |
8 附文 | 第90-119页 |