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宿主细胞磷脂酶D调控李斯特菌侵入上皮细胞过程的机制研究

中文摘要第1-9页
英文摘要(Abstract)第9-10页
1 缩略词表第10-12页
2 前言第12-26页
   ·李斯特菌概述第12-13页
   ·李斯特菌的致病性第13-14页
   ·李斯特菌的感染周期第14页
   ·介导李斯特菌侵入非吞噬细胞的毒力蛋白-内化素家族蛋白第14-15页
   ·InlB诱导的细胞信号转导第15-17页
   ·Cofilin的细胞功能第17-18页
   ·磷脂酶D概述第18-19页
   ·哺乳动物的磷脂酶D第19-20页
   ·PLD的胞内定位第20-21页
   ·PLD1和PLD2的调节分子第21页
   ·磷脂酶D的功能第21-23页
   ·本研究要解决的主要问题第23-24页
   ·主要技术路线第24-25页
   ·研究目的和意义第25-26页
3 材料与方法第26-40页
   ·实验材料第26-32页
     ·菌株第26页
     ·细胞株第26页
     ·质粒及腺病毒第26-27页
     ·抗体第27页
     ·主要试剂及配制方法第27-31页
     ·主要仪器及耗材第31-32页
   ·实验方法第32-40页
     ·细胞培养第32页
     ·细菌培养第32页
     ·重组腺病毒感染vero细胞第32页
     ·在完整细胞中测定PLD活性第32-33页
     ·体外侵染分析第33页
     ·RNA干扰第33-34页
     ·质粒DNA的大量提取第34-35页
     ·vero细胞的转染第35页
     ·细胞裂解第35页
     ·蛋白浓度测定(Bradford法)第35-36页
     ·Western-Blot第36-37页
     ·vero细胞内的肌动蛋白骨架染色第37页
     ·InlB蛋白纯化第37-38页
     ·免疫荧光实验第38页
     ·统计学分析第38-40页
4 结果及讨论第40-78页
   ·结果第40-72页
     ·李斯特菌侵染vero细胞的基本规律第40-42页
     ·李斯特菌侵染能够激活vero细胞PLD活性第42-44页
     ·李斯特菌和PLD在内化侵入过程中的共定位第44-45页
     ·PLD化学抑制剂能够抑制李斯特菌侵入vero细胞及李斯特菌诱导的宿主细胞PLD激活第45-48页
     ·PLD缺陷型蛋白在vero细胞中的过表达抑制李斯特菌的侵染和李斯特菌诱导的宿主PLD激活 #434.1.6 vero细胞内源PLD沉默抑制李斯特菌的侵染和李斯特菌诱导的宿主PLD激活第48-51页
     ·vero细胞内源PLD沉默抑制李斯特菌的侵染和李斯特菌诱导的宿主PLD激活第51-53页
     ·InlB缺陷菌株不能诱导vero细胞PLD激活第53-56页
     ·InlB蛋白能够直接诱导宿主PLD活性的升高第56-58页
     ·InlB蛋白能够挽救InlB缺陷菌株的侵染能力和激活宿主PLD的能力第58-60页
     ·InlB蛋白通过vero细胞表面的Met受体介导李斯特菌的侵入和宿主PLD的激活第60-62页
     ·Cofilin磷酸化状态调节李斯特菌侵入和InlB诱导的vero细胞PLD激活第62-70页
     ·PLD1的F-3片段在vero细胞中的表达能够抑制李斯特菌侵入宿主细胞和InlB诱导的PLD激活第70-72页
   ·总结第72-74页
   ·讨论第74-78页
5 参考文献第78-86页
6 在站期间发表的文章第86-88页
7 致谢第88-90页
8 附文第90-119页

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