| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 名词缩写 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 香石竹概况 | 第12-14页 |
| ·蓝色香石竹的由来 | 第12-13页 |
| ·类黄酮-3',5'-羟化酶在花色素苷合成途径中的位置 | 第13页 |
| ·类黄酮-3',5'-羟化酶基因的研究进展 | 第13-14页 |
| 2 转基因植物的生物安全评价 | 第14-15页 |
| 3 土壤微生物生态学研究进展 | 第15-17页 |
| ·克隆文库分析法的原理 | 第15-16页 |
| ·细菌16S rDNA克隆文库法 | 第16页 |
| ·细菌16S rDNA克隆文库法的应用 | 第16-17页 |
| ·细菌16S rDNA克隆文库法中的存在的问题及应对 | 第17页 |
| ·其他的微生物生态学方法 | 第17页 |
| 4 本文选题依据 | 第17-20页 |
| 第二章 转基因香石竹F3'5'H基因的遗传稳定性研究 | 第20-36页 |
| 第一节 转基因香石竹中F3'5'H基因的克隆 | 第21-26页 |
| 1 实验材料 | 第21页 |
| ·植株和菌株 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·培养基与缓冲液 | 第21页 |
| 2 实验方法 | 第21-23页 |
| ·香石竹基因组DNA的提取(试剂盒法) | 第21-22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·类黄酮-3',5'-羟化酶全长基因的PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·类黄酮-3',5'-羟化酶全长基因的克隆 | 第23页 |
| 3 结果与讨论 | 第23-26页 |
| 第二节 转基因香石竹中F3'5'H基因的原核表达 | 第26-31页 |
| 1 实验材料 | 第26页 |
| ·菌种 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26页 |
| 2 实验方法 | 第26-30页 |
| ·F3'5'H全长基因和pET-28a质粒的获得 | 第26页 |
| ·F3'5'H全长基因和pET-28a的质粒酶切 | 第26-27页 |
| ·片段与质粒的连接 | 第27页 |
| ·连接产物的转化及表达菌株的构建 | 第27-28页 |
| ·F3'5'H重组蛋白的诱导表达 | 第28-29页 |
| ·F3'5'H重组蛋白的纯化 | 第29页 |
| ·F3'5'H重组蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 | 第29-30页 |
| 3 结果与讨论 | 第30-31页 |
| 第三节 转基因香石竹中F3'5'H基因的多克隆抗体的制备及免疫学鉴定 | 第31-36页 |
| 1 实验材料 | 第31页 |
| ·实验用动物 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-33页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第31页 |
| ·ELISA检测 | 第31-32页 |
| ·Moonshade和Moonlite花朵总蛋白的提取 | 第32页 |
| ·Western Blot检测 | 第32-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-36页 |
| ·ELISA检测 | 第33页 |
| ·Western blot检测 | 第33-36页 |
| 第三章 转基因香石竹对土壤微生物群落结构的影响 | 第36-58页 |
| 第一节 土壤微生物的纯培养试验 | 第37-40页 |
| 1 实验材料 | 第37页 |
| ·土壤样品 | 第37页 |
| ·试剂及培养基配方 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-38页 |
| ·土壤溶液的制备 | 第37页 |
| ·培养 | 第37页 |
| ·结果统计与分析 | 第37-38页 |
| 3 结果与讨论 | 第38-40页 |
| 第二节 土壤微生物的总DNA的提取 | 第40-44页 |
| 1 实验材料 | 第40页 |
| ·土壤样品 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-41页 |
| ·实验室手提法 | 第40-41页 |
| ·试剂盒法 | 第41页 |
| ·数据处理 | 第41页 |
| ·电泳 | 第41页 |
| 3 结果与讨论 | 第41-44页 |
| 第三节 16S rDNA克隆文库分析 | 第44-58页 |
| 1 试验材料 | 第44页 |
| ·土壤DNA | 第44页 |
| ·试剂及培养基 | 第44页 |
| 2 试验方法 | 第44-48页 |
| ·16S rDNA区扩增 | 第44-45页 |
| ·16S rDNA目的片段的回收纯化 | 第45页 |
| ·16S rDNA克隆文库的建立 | 第45-47页 |
| ·酶切分型(ARDRA)分析 | 第47-48页 |
| 3 结果与讨论 | 第48-58页 |
| ·细菌16S rDNA的PCR扩增 | 第48-49页 |
| ·细菌16S rDNA的克隆文库分析 | 第49-58页 |
| 全文总结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 附录 培养基及试剂配方 | 第68-74页 |
| 发表论文及专利 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
