| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第6-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 1.序言 | 第10-20页 |
| ·课题的提出 | 第10-18页 |
| ·植物生长素的生物活性 | 第10-11页 |
| ·生长素信号转导 | 第11-18页 |
| ·生长素受体 | 第11-14页 |
| ·生长素结合蛋白(ABPI) | 第11-13页 |
| ·生长素运输抑制反应1(TIR1) | 第13-14页 |
| ·生长素的信号转导机制 | 第14-18页 |
| ·生长素诱导的基因转录 | 第14-16页 |
| ·生长素响应因子ARFs结构及其功能 | 第16-18页 |
| ·对Aux/IAA基因功能的研究 | 第18页 |
| ·本研究目的和主要内容 | 第18-20页 |
| ·研究目的 | 第18页 |
| ·研究内容 | 第18-20页 |
| 第一章 两个SLIAA基因的启动子克隆 | 第20-31页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·植物材料 | 第20页 |
| ·菌株与载体 | 第20页 |
| ·仪器与试剂 | 第20-21页 |
| ·仪器 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·试剂配制 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-23页 |
| ·同源序列法PCR扩增SlIAA9启动子DNA序列 | 第21页 |
| ·引物合成 | 第21页 |
| ·PCR反应体系的建立 | 第21页 |
| ·Genomic DNA walking获得SlIAA14基因启动子DNA序列 | 第21-22页 |
| ·特异引物合成 | 第21页 |
| ·PCR反应程序 | 第21-22页 |
| ·PCR扩增目的片段的克隆 | 第22-23页 |
| ·通用引物合成 | 第22页 |
| ·特异PCR产物的回收纯化 | 第22页 |
| ·回收的PCR产物与pEASY-T_1载体的连接 | 第22-23页 |
| ·PCR筛选阳性克隆 | 第23页 |
| ·测序 | 第23页 |
| ·结果与分析 | 第23-31页 |
| ·同源序列法扩增SlIAA9启动子DNA片段 | 第23-24页 |
| ·SlIAA9基因启动子的克隆 | 第24页 |
| ·SlIAA9基因启动子克隆片段的测序及分析 | 第24-29页 |
| ·Genomic DNA walking获得SlIAA14基因启动子DNA序列 | 第29-31页 |
| 第二章 IAA基因的特异启动子表达载体的构建 | 第31-38页 |
| ·实验方法 | 第31-36页 |
| ·载体大片段的准备 | 第32页 |
| ·pMV2G载体质粒酶切 | 第32页 |
| ·载体酶切回收产物去磷酸化 | 第32页 |
| ·启动子DNA片段的准备 | 第32-34页 |
| ·PCR获得P_(SlIAA9)和P_(SlIAA14)高保真片段 | 第32-33页 |
| ·引物合成 | 第33页 |
| ·PCR扩增P_(SlIAA9),P_(SlIAA14)片段 | 第33页 |
| ·P_(SlIAA9)及P_(SlIAA14)片段的克隆 | 第33页 |
| ·P_(SlIAA9)及P_(SlIAA14)启动子DNA片段的重组质粒提取 | 第33页 |
| ·P_(SlIAA9)及P_(SlIAA14)片段的双酶切 | 第33-34页 |
| ·载体酶切片段与启动子DNA片段P_(SlIAA9)及P_(SlIAA14)的连接 | 第34页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5a | 第34-35页 |
| ·大肠杆菌DH5a感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·连接产物热激转化大肠杆菌 | 第34页 |
| ·转化子的PCR检测筛选 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的提取及酶切鉴定 | 第35页 |
| ·表达载体SlIAA9::SlIAA9的构建 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-38页 |
| 第三章 IAA基因特异启动子转化番茄分析 | 第38-44页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·表达载体电激法转化农杆菌 | 第38页 |
| ·农杆菌电击感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·电激转化 | 第38页 |
| ·PCR鉴定阳性克隆 | 第38页 |
| ·番茄的遗传转化 | 第38-40页 |
| ·培养基的配制 | 第38-39页 |
| ·番茄遗传转化体系 | 第39-40页 |
| ·转基因植株的PCR阳性检测 | 第40页 |
| ·番茄转基因植株DNA的提取 | 第40页 |
| ·PCR检测转基因植株 | 第40页 |
| ·转基因番茄的炼苗移栽 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-44页 |
| ·农杆菌转化子的鉴定 | 第40-42页 |
| ·表达载体转化番茄植株 | 第42页 |
| ·转基因植株PCR检测 | 第42-44页 |
| 第四章 启动子表达模式观察及番茄ENTIRE突变体恢复验证 | 第44-48页 |
| ·YFP荧光显微镜观察及GUS组织化学染色分析 | 第44-47页 |
| ·试剂配制 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·YFP体视荧光显微镜观察 | 第44页 |
| ·GUS组织化学染色方法 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-47页 |
| ·显微镜观察转基因植株根系 | 第45页 |
| ·转基因植株的GUS染色 | 第45-47页 |
| ·SLIAA9::SLIAA9转番茄ENTIRE突变体植株观察 | 第47-48页 |
| 第五章 讨论 | 第48-50页 |
| ·Genomic DNA walking及同源序列法扩增启动子DNA序列 | 第48页 |
| ·启动子结构特点及其元件分析 | 第48-49页 |
| ·启动子驱动基因的特异表达 | 第49页 |
| ·entire突变体叶型的恢复 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 附录 | 第57-59页 |
| 附录1.番茄基因组DNA小量提取法 | 第57-58页 |
| 附录2.质粒小量提取法 | 第58页 |
| 附录3.连接产物转化大肠杆菌 | 第58-59页 |
| 附录4.硕士在读期间发表的论文 | 第59页 |
