| 致谢 | 第5-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 中英文缩略 | 第12-21页 |
| 1 绪论 | 第21-55页 |
| 1.1 天然免疫概述 | 第21-23页 |
| 1.2 TLR信号通路 | 第23-25页 |
| 1.3 细胞质DNA识别 | 第25-29页 |
| 1.3.1 细胞质DNA受体cGAS及第二信使cGAMP | 第26-27页 |
| 1.3.2 cGAS-STING信号通路及其活性调控 | 第27-29页 |
| 1.3.3 其他细胞质DNA识别受体 | 第29页 |
| 1.4 细胞质RNA识别 | 第29-38页 |
| 1.4.1 RIG-I样受体概述 | 第30页 |
| 1.4.2 RIG-I样受体结构及其RNA识别活化机制 | 第30-33页 |
| 1.4.3 RLR-MAVS信号通路 | 第33-35页 |
| 1.4.4 RLR-MAVS信号通路的活性调控 | 第35-36页 |
| 1.4.5 MAVS的活化与调控 | 第36-37页 |
| 1.4.6 其余细胞质RNA识别受体 | 第37-38页 |
| 1.5 核酸识别关键激酶TBK1的活性调控 | 第38-39页 |
| 1.6 细胞质核酸天然免疫识别的生物学功能 | 第39-40页 |
| 1.7 酪氨酸激酶 | 第40-47页 |
| 1.7.1 酪氨酸激酶家族概述 | 第40-41页 |
| 1.7.2 受体酪氨酸激酶结构和分类 | 第41-42页 |
| 1.7.3 受体酪氨酸激酶活化调控 | 第42-44页 |
| 1.7.4 非受体酪氨酸激酶结构和分类 | 第44-45页 |
| 1.7.5 非受体酪氨酸激酶活化调控 | 第45页 |
| 1.7.6 Src家族激酶 | 第45-46页 |
| 1.7.7 非受体酪氨酸激酶与免疫 | 第46-47页 |
| 1.8 线粒体动力学及其功能 | 第47-53页 |
| 1.8.1 线粒体概述 | 第47页 |
| 1.8.2 线粒体动力学概述 | 第47-48页 |
| 1.8.3 线粒体融合相关蛋白及其调控机制 | 第48-51页 |
| 1.8.4 线粒体分裂相关蛋白及其调控机制 | 第51-52页 |
| 1.8.5 线粒体动力学与RLR-MAVS信号轴 | 第52-53页 |
| 1.9 NME家族简介 | 第53-55页 |
| 1.9.1 线粒体核苷激酶—NME4 | 第53-55页 |
| 2 材料和方法 | 第55-77页 |
| 2.1 实验材料 | 第55-61页 |
| 2.1.1 质粒及质粒构建相关材料 | 第55-56页 |
| 2.1.2 细胞系及细胞培养相关材料 | 第56-57页 |
| 2.1.3 抗体 | 第57-58页 |
| 2.1.4 病毒、核酸类似物及小分子抑制剂 | 第58-59页 |
| 2.1.5 荧光素酶报告基因检测试剂盒 | 第59页 |
| 2.1.6 总RNA提取、反转录及实时荧光定量PCR试剂和材料 | 第59页 |
| 2.1.7 蛋白免疫印迹试剂和材料 | 第59-60页 |
| 2.1.8 其余试剂及耗材 | 第60页 |
| 2.1.9 实验仪器和设备 | 第60-61页 |
| 2.2 分子生物学实验方法 | 第61-66页 |
| 2.2.1 质粒构建 | 第61-63页 |
| 2.2.2 组织或细胞总RNA提取及反转录 | 第63-64页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR(qPCR) | 第64-66页 |
| 2.3 细胞生物学实验方法 | 第66-70页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第66页 |
| 2.3.2 CRISPR-Cas9技术构建基因敲除细胞系 | 第66-67页 |
| 2.3.3 细胞转染和病毒感染实验 | 第67页 |
| 2.3.4 荧光素酶报告基因检测 | 第67-68页 |
| 2.3.5 免疫荧光染色实验 | 第68页 |
| 2.3.6 Mitotracker染色实验 | 第68-69页 |
| 2.3.7 JC-1线粒体膜电位染色实验 | 第69页 |
| 2.3.8 透射电镜样品制备 | 第69-70页 |
| 2.4 生物化学实验方法 | 第70-74页 |
| 2.4.1 蛋白免疫印迹实验 | 第70-72页 |
| 2.4.2 蛋白免疫共沉淀实验 | 第72-73页 |
| 2.4.3 体外激酶分析实验 | 第73-74页 |
| 2.5 动物实验方法 | 第74-76页 |
| 2.5.1 小鼠繁殖 | 第74页 |
| 2.5.2 小鼠基因型鉴定 | 第74页 |
| 2.5.3 小鼠外周血单核细胞(PBMC)分离 | 第74-75页 |
| 2.5.4 小鼠腹腔巨噬细胞(PM)分离 | 第75页 |
| 2.5.5 斑马鱼培养 | 第75页 |
| 2.5.6 构建转基因斑马鱼 | 第75-76页 |
| 2.5.7 VSV病毒感染斑马鱼 | 第76页 |
| 2.6 统计学分析 | 第76-77页 |
| 3 酪氨酸激酶在细胞质核酸免疫识别中的功能与机制研究 | 第77-93页 |
| 3.1 IRF3诱导的Lck/Hck/Fgr动态酪氨酸磷酸化TBK1 | 第77-81页 |
| 3.1.1 TBK1在病毒感染过程中被SFKs动态酪氨酸磷酸化 | 第77-78页 |
| 3.1.2 抗病毒信号活化诱导Lck/Hck/Fgr转录表达 | 第78-79页 |
| 3.1.3 TBK1-IRF3信号激活诱导Lck/Hck/Fgr转录表达 | 第79-80页 |
| 3.1.4 Lck/Hck/Fgr介导TBK1酪氨酸磷酸化 | 第80-81页 |
| 3.2 Lck/Hck/Fgr负调控细胞质核酸免疫识别 | 第81-84页 |
| 3.2.1 Lck/Hck/Fgr抑制细胞质核酸识别 | 第81-82页 |
| 3.2.2 Lck/Hck/Fgr敲除促进细胞质核酸识别 | 第82-84页 |
| 3.3 Lck/Hck/Fgr蛋白决定宿主抗病毒防御功能 | 第84-86页 |
| 3.3.1 Lck/Hck/Fgr抑制细胞抗病毒防御能力 | 第84-85页 |
| 3.3.2 Lck/Hck/Fgr削弱斑马鱼和小鼠抗病毒防御能力 | 第85-86页 |
| 3.4 Lck/Hck/Fgr调节细胞质核酸免疫识别的分子机制 | 第86-91页 |
| 3.4.1 Lck/Hck/Fgr与TBK1存在共定位 | 第86-87页 |
| 3.4.2 Lck/Hck/Fgr直接酪氨酸磷酸化TBK1 | 第87-88页 |
| 3.4.3 Lck/Hck/Fgr直接酪氨酸磷酸化TBK1 Y354和Y394位点 | 第88-89页 |
| 3.4.4 TBK1 Tyr354和Tyr394磷酸化抑制TBK1活性 | 第89-91页 |
| 3.4.5 TBK1酪氨酸磷酸化破坏TBK1二聚化 | 第91页 |
| 3.5 Lck/Hck/Fgr调控核酸免疫识别及细胞抗病毒天然免疫的分子模型 | 第91-93页 |
| 4 核苷激酶NME4在细胞质RNA识别与宿主抗病毒防御中的功能 | 第93-104页 |
| 4.1 NME4在细胞质核酸免疫识别及宿主抗病毒免疫应答中的功能 | 第93-98页 |
| 4.1.1 NME家族成员NME4增强细胞质RNA免疫识别 | 第93-94页 |
| 4.1.2 NME4增强细胞质RNA识别信号依赖于其激酶活性及线粒体定位 | 第94-96页 |
| 4.1.3 NME4敲除抑制细胞质RNA识别 | 第96-98页 |
| 4.2 NME4蛋白决定细胞抗病毒宿主防御功能 | 第98-101页 |
| 4.2.1 过表达NME4蛋白增强细胞抗病毒能力 | 第98-99页 |
| 4.2.2 NME4基因敲除削弱宿主细胞抵御RNA病毒感染的能力 | 第99-101页 |
| 4.3 NME4敲除影响小鼠自身抗病毒免疫防御能力 | 第101-104页 |
| 4.3.1 NME4全身敲除小鼠构建 | 第101-102页 |
| 4.3.2 NME4敲除影响小鼠自身抗病毒防御能力 | 第102-104页 |
| 5 NME4调控细胞质RNA免疫识别的分子机制 | 第104-118页 |
| 5.1 NME4蛋白促进MAVS聚集及与下游关键激酶的相互作用 | 第104-107页 |
| 5.1.1 NME4促进MAVS与IKKε相互作用及NF-κB信号通路的激活 | 第104-105页 |
| 5.1.2 NME4蛋白促进MAVS聚集 | 第105-107页 |
| 5.2 NME4通过线粒体动力学影响MAVS聚集 | 第107-114页 |
| 5.2.1 细胞质RNA识别信号活化促进线粒体融合 | 第107-108页 |
| 5.2.2 NME4敲除细胞丧失线粒体融合能力 | 第108-110页 |
| 5.2.3 NME4通过线粒体动力学促进MAVS聚集活化 | 第110-112页 |
| 5.2.4 MFN1和MFN2不能恢复NME4敲除对细胞质RNA识别信号的影响 | 第112-114页 |
| 5.3 NME4蛋白通过OPA1调控细胞质RNA识别 | 第114-118页 |
| 5.3.1 GTP水解酶OPA1促进细胞质RNA识别信号 | 第114-116页 |
| 5.3.2 NME4蛋白通过OPA1调控细胞质RNA识别信号 | 第116-118页 |
| 6 讨论和总结 | 第118-122页 |
| 6.1 蛋白酪氨酸磷酸化调控细胞质核酸识别信号网络 | 第118-119页 |
| 6.2 蛋白酪氨酸磷酸化调控在宿主抗病毒天然免疫中的功能和展望 | 第119-120页 |
| 6.3 NME4介导细胞质RNA识别信号网络调控的机制 | 第120-121页 |
| 6.4 细胞器动力学在抗病毒天然免疫中的功能与展望 | 第121-122页 |
| 7 参考文献 | 第122-141页 |
| 作者简历及研究生期间取得的科研成绩 | 第141-142页 |
