| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-18页 |
| 1.1 植物线粒体及其基因组特点 | 第11-14页 |
| 1.2 植物细胞质雄性不育 | 第14-15页 |
| 1.3 线粒体基因组与植物细胞质雄性不育 | 第15-16页 |
| 1.4 本研究的主要内容及意义 | 第16-18页 |
| 第二章 水稻线粒体基因orf290功能分析 | 第18-42页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 材料、方法及设备 | 第18-23页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第18页 |
| 2.2.2 载体和菌株 | 第18-19页 |
| 2.2.3 实验试剂及培养基配方 | 第19-23页 |
| 2.2.3.1 主要试剂 | 第19页 |
| 2.2.3.2 组织培养相关试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.3.3 主要培养基及溶液配方 | 第20-21页 |
| 2.2.3.4 植物总DNA提取用CTAB试剂配方(1.67%) | 第21-22页 |
| 2.2.3.5 碱裂解法小量质粒DNA提取试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.4 实验设备 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-33页 |
| 2.3.1 CTAB法小量提取水稻叶片基因组DNA | 第23页 |
| 2.3.2 水稻线粒体基因orf290的克隆 | 第23-25页 |
| 2.3.2.1 水稻线粒体基因orf290ORF全长的扩增 | 第23-24页 |
| 2.3.2.2 PCR产物的凝胶回收与纯化 | 第24页 |
| 2.3.2.3 目的片段的TA克隆 | 第24页 |
| 2.3.2.4 热激转化大肠杆菌DH5α | 第24-25页 |
| 2.3.2.5 TA克隆的阳性鉴定 | 第25页 |
| 2.3.3 水稻线粒体信号肽Rf1b5’的克隆 | 第25-26页 |
| 2.3.3.1 明恢63(MH63)育性恢复基因Rf1bORF全长的扩增 | 第25-26页 |
| 2.3.3.2 线粒体信号肽目的片段的扩增 | 第26页 |
| 2.3.3.3 PCR产物清洁纯化 | 第26页 |
| 2.3.4 水稻线粒体基因orf290超表达载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.3.4.1 orf290和pCAMBIA1305.1质粒DNA的酶切与纯化 | 第26-27页 |
| 2.3.4.2 目的片段的连接、转化与鉴定 | 第27页 |
| 2.3.5 带有线粒体信号肽的orf290超表达载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.3.5.1 水稻线粒体信号肽Rf1b5’与pCAMBIA1305.1的组装 | 第27-28页 |
| 2.3.5.2 orf290与pCAMBIA1305.1-Rf1b5’的组装 | 第28-29页 |
| 2.3.6 电击转化根癌农杆菌EHA105及鉴定 | 第29页 |
| 2.3.6.1 pCAMBIA1305.1-Rf1b5’-orf290、pCAMBIA1305.1-orf290电击转化农杆菌 | 第29页 |
| 2.3.6.2 电转农杆菌阳性鉴定和保存 | 第29页 |
| 2.3.7 农杆菌介导水稻的遗传转化 | 第29-31页 |
| 2.3.7.1 水稻愈伤组织的诱导及继代 | 第29页 |
| 2.3.7.2 愈伤组织的预培养 | 第29页 |
| 2.3.7.3 农杆菌菌株的活化及培养 | 第29-30页 |
| 2.3.7.4 愈伤组织的侵染及共培养 | 第30页 |
| 2.3.7.5 愈伤组织的筛选 | 第30页 |
| 2.3.7.6 愈伤组织的分化 | 第30页 |
| 2.3.7.7 幼苗的生根及炼苗 | 第30-31页 |
| 2.3.8 转基因T0代植株的阳性鉴定 | 第31页 |
| 2.3.8.1 转基因植株基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 2.3.8.2 转基因植株PCR鉴定 | 第31页 |
| 2.3.9 转基因植株花粉育性及结实率统计 | 第31页 |
| 2.3.10 转基因拷贝数鉴定 | 第31页 |
| 2.3.11 水稻叶片总RNA提取 | 第31-32页 |
| 2.3.12 总RNA中基因组DNA去除、cDNA的合成及检测 | 第32页 |
| 2.3.13 转基因植株pCAMBIA1305.1-Rf1b5’-orf290表达量分析 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第33-40页 |
| 2.4.1 水稻线粒体基因orf290的克隆 | 第33页 |
| 2.4.2 水稻线粒体信号肽的克隆 | 第33-34页 |
| 2.4.3 水稻线粒体基因orf290的超表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.4.4 带有信号肽的水稻线粒体基因orf290的超表达载体的构建 | 第35页 |
| 2.4.5 农杆菌菌株PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.6 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第36-37页 |
| 2.4.7 转基因T0代植株的阳性鉴定 | 第37页 |
| 2.4.8 转基因植株花粉育性及结实率统计 | 第37-38页 |
| 2.4.9 转基因植株拷贝数鉴定 | 第38-39页 |
| 2.4.10 转基因植株pCAMBIA1305.1-Rf1b5’-orf290表达量分析 | 第39-40页 |
| 2.5 讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 L-orf290候选材料中orf290序列比较分析 | 第42-50页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料、试剂及设备 | 第42-43页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第42页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.3 实验设备 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-44页 |
| 3.3.1 基因组DNA的提取 | 第43页 |
| 3.3.2 水稻叶片总RNA的提取 | 第43页 |
| 3.3.3 总RNA去除基因组DNA及cDNA的合成 | 第43页 |
| 3.3.4 L-orf290中orf290相关片段的扩增及克隆 | 第43-44页 |
| 3.3.4.1 orf290相关片段的扩增及克隆 | 第43-44页 |
| 3.3.5 L-orf290和YTA中orf290序列的比对分析 | 第44页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第44-48页 |
| 3.4.1 L-orf290中orf290PCR扩增及产物克隆 | 第44-46页 |
| 3.4.1.1 以z604、z616、z597gDNA为模板的PCR扩增及克隆 | 第44-45页 |
| 3.4.1.2 以z604、z616、z597cDNA为模板的PCR扩增及克隆 | 第45-46页 |
| 3.4.2 L-orf290中orf290相关片段的序列分析 | 第46-48页 |
| 3.5 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第58页 |
| 参与的科研课题 | 第58页 |
| 参与的学术会议 | 第58页 |
