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拟南芥AOX超表达体构建与突变体鉴定及AOX2功能的初步分析

中文摘要第3-5页
Abstract第5-6页
Abbreviations第7-12页
第一章 前言综述第12-27页
    1.1 交替途径第12-20页
        1.1.1 交替途径的发现第12-13页
        1.1.2 交替氧化酶的蛋白结构第13-15页
        1.1.3 交替氧化酶在植物体内的生理功能第15-16页
        1.1.4 交替氧化酶在线粒体呼吸电子传递链中的位置第16-17页
        1.1.5 交替氧化酶基因家族的介绍第17-20页
    1.2 种子萌发第20-21页
        1.2.1 影响种子萌发的内部因素第20页
        1.2.2 影响种子萌发的外部因素第20-21页
    1.3 植物激素对种子萌发的调控作用第21-24页
        1.3.1 植物激素脱落酸在种子萌发过程中的调控作用第21-23页
        1.3.2 植物激素赤霉素在种子萌发过程中的调控作用第23页
        1.3.3 脱落酸和赤霉素在调控种子休眠和萌发中的互作第23-24页
    1.4 利用Gateway技术构建拟南芥的表达载体第24-27页
第二章 实验材料及方法第27-38页
    2.1 实验材料与试剂第27-30页
        2.1.1 植物材料第27页
        2.1.2 菌株与质粒第27页
        2.1.3 酶及试剂第27-29页
        2.1.4 常用试剂及培养基的配置第29-30页
    2.2 实验方法第30-38页
        2.2.1 材料处理第30页
        2.2.2 植物DNA提取第30-31页
        2.2.3 拟南芥叶片总RNA提取第31页
        2.2.4 RT-PCR合成拟南芥cDNA链第31-32页
        2.2.5 PCR扩增AOX家族基因第32页
        2.2.6 琼脂糖凝胶电泳分析第32页
        2.2.7 胶回收纯化PCR产物第32-33页
        2.2.8 将PCR产物连接进pEASY-Blunt平末端载体第33页
        2.2.9 转化大肠杆菌DH5α第33页
        2.2.10 质粒DNA的小量提取第33-34页
        2.2.11 限制性内切酶酶切体系第34页
        2.2.12 连接入门载体pENTR-D-TOPO载体第34页
        2.2.13 构建表达载体pGWB2-AOX第34-35页
        2.2.14 农杆菌GV3101感受态的制备第35页
        2.2.15 GV3101感受态细胞的转化第35页
        2.2.16 花序浸染法侵染拟南芥花序第35-36页
        2.2.17 筛选阳性克隆植株第36页
        2.2.18 实时荧光定量qRT-PCR第36-37页
        2.2.19 T-DNA突变体纯合体的鉴定第37-38页
第三章 实验结果第38-53页
    3.1 AOX家族基因T-DNA插入及超表达突变体纯合体的筛选与鉴定第38-45页
        3.1.1 AOX家族基因T-DNA插入突变体纯合植株的筛选与鉴定第38-39页
        3.1.2 AOX1a和AOX2基因PCR扩增产物的克隆及筛选第39页
        3.1.3 pEASY-Blunt-AOX重组质粒的构建及酶切鉴定第39-40页
        3.1.4 AOX1a和AOX2基因的双元表达载体的构建及酶切鉴定第40-41页
        3.1.5 拟南芥AOX家族基因表达载体pGWB2的构建与鉴定第41-42页
        3.1.6 pGWB2-AOX融合表达载体转化农杆菌第42-43页
        3.1.7 超表达AOX基因株系的筛选第43-44页
        3.1.8 AOX超表达植株的鉴定第44页
        3.1.9 AOX家族基因的表达模式分析第44-45页
    3.2 AOX2在拟南芥种子萌发中的作用第45-53页
        3.2.1 ABA对AOX2基因突变体及转基因植物种子萌发的影响第45-47页
        3.2.2 外源添加ABA对幼苗子叶转绿的影响第47-48页
        3.2.3 外源添加ABA对幼苗主根生长的影响第48-49页
        3.2.4 GA3和ABA对AOX2缺失突变体及过表达系种子萌发的影响第49-51页
        3.2.5 外源GA3和ABA对幼苗子叶转绿的影响第51-52页
        3.2.6 在AOX2缺失突变体和过表达系中ABA响应基因的表达水平第52-53页
第四章 讨论及小结第53-56页
    4.1 AOX家族基因超表达植株和缺失突变体的获得第53页
    4.2 AOX家族基因表达模式第53-54页
    4.3 AOX2在种子萌发以及幼苗生长期负调ABA信号第54页
    4.4 AOX2参与GA信号途径对拟南芥种子萌发的调控第54-56页
附录 测序比对结果第56-60页
    附录A:T-DNA插入突变体aox1a(Salk_084897)测序鉴定结果第56-57页
    附录B:T-DNA插入突变体aox1c(CS804611)测序鉴定结果第57-58页
    附录C:T-DNA插入突变体aox2(CS766955)测序鉴定结果第58-59页
    附录D:表达载体pGWB2-AOX2测序鉴定结果第59-60页
参考文献第60-69页
在学期间的研究成果第69-70页
致谢第70页

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