中文摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
Abbreviations | 第7-12页 |
第一章 前言综述 | 第12-27页 |
1.1 交替途径 | 第12-20页 |
1.1.1 交替途径的发现 | 第12-13页 |
1.1.2 交替氧化酶的蛋白结构 | 第13-15页 |
1.1.3 交替氧化酶在植物体内的生理功能 | 第15-16页 |
1.1.4 交替氧化酶在线粒体呼吸电子传递链中的位置 | 第16-17页 |
1.1.5 交替氧化酶基因家族的介绍 | 第17-20页 |
1.2 种子萌发 | 第20-21页 |
1.2.1 影响种子萌发的内部因素 | 第20页 |
1.2.2 影响种子萌发的外部因素 | 第20-21页 |
1.3 植物激素对种子萌发的调控作用 | 第21-24页 |
1.3.1 植物激素脱落酸在种子萌发过程中的调控作用 | 第21-23页 |
1.3.2 植物激素赤霉素在种子萌发过程中的调控作用 | 第23页 |
1.3.3 脱落酸和赤霉素在调控种子休眠和萌发中的互作 | 第23-24页 |
1.4 利用Gateway技术构建拟南芥的表达载体 | 第24-27页 |
第二章 实验材料及方法 | 第27-38页 |
2.1 实验材料与试剂 | 第27-30页 |
2.1.1 植物材料 | 第27页 |
2.1.2 菌株与质粒 | 第27页 |
2.1.3 酶及试剂 | 第27-29页 |
2.1.4 常用试剂及培养基的配置 | 第29-30页 |
2.2 实验方法 | 第30-38页 |
2.2.1 材料处理 | 第30页 |
2.2.2 植物DNA提取 | 第30-31页 |
2.2.3 拟南芥叶片总RNA提取 | 第31页 |
2.2.4 RT-PCR合成拟南芥cDNA链 | 第31-32页 |
2.2.5 PCR扩增AOX家族基因 | 第32页 |
2.2.6 琼脂糖凝胶电泳分析 | 第32页 |
2.2.7 胶回收纯化PCR产物 | 第32-33页 |
2.2.8 将PCR产物连接进pEASY-Blunt平末端载体 | 第33页 |
2.2.9 转化大肠杆菌DH5α | 第33页 |
2.2.10 质粒DNA的小量提取 | 第33-34页 |
2.2.11 限制性内切酶酶切体系 | 第34页 |
2.2.12 连接入门载体pENTR-D-TOPO载体 | 第34页 |
2.2.13 构建表达载体pGWB2-AOX | 第34-35页 |
2.2.14 农杆菌GV3101感受态的制备 | 第35页 |
2.2.15 GV3101感受态细胞的转化 | 第35页 |
2.2.16 花序浸染法侵染拟南芥花序 | 第35-36页 |
2.2.17 筛选阳性克隆植株 | 第36页 |
2.2.18 实时荧光定量qRT-PCR | 第36-37页 |
2.2.19 T-DNA突变体纯合体的鉴定 | 第37-38页 |
第三章 实验结果 | 第38-53页 |
3.1 AOX家族基因T-DNA插入及超表达突变体纯合体的筛选与鉴定 | 第38-45页 |
3.1.1 AOX家族基因T-DNA插入突变体纯合植株的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
3.1.2 AOX1a和AOX2基因PCR扩增产物的克隆及筛选 | 第39页 |
3.1.3 pEASY-Blunt-AOX重组质粒的构建及酶切鉴定 | 第39-40页 |
3.1.4 AOX1a和AOX2基因的双元表达载体的构建及酶切鉴定 | 第40-41页 |
3.1.5 拟南芥AOX家族基因表达载体pGWB2的构建与鉴定 | 第41-42页 |
3.1.6 pGWB2-AOX融合表达载体转化农杆菌 | 第42-43页 |
3.1.7 超表达AOX基因株系的筛选 | 第43-44页 |
3.1.8 AOX超表达植株的鉴定 | 第44页 |
3.1.9 AOX家族基因的表达模式分析 | 第44-45页 |
3.2 AOX2在拟南芥种子萌发中的作用 | 第45-53页 |
3.2.1 ABA对AOX2基因突变体及转基因植物种子萌发的影响 | 第45-47页 |
3.2.2 外源添加ABA对幼苗子叶转绿的影响 | 第47-48页 |
3.2.3 外源添加ABA对幼苗主根生长的影响 | 第48-49页 |
3.2.4 GA3和ABA对AOX2缺失突变体及过表达系种子萌发的影响 | 第49-51页 |
3.2.5 外源GA3和ABA对幼苗子叶转绿的影响 | 第51-52页 |
3.2.6 在AOX2缺失突变体和过表达系中ABA响应基因的表达水平 | 第52-53页 |
第四章 讨论及小结 | 第53-56页 |
4.1 AOX家族基因超表达植株和缺失突变体的获得 | 第53页 |
4.2 AOX家族基因表达模式 | 第53-54页 |
4.3 AOX2在种子萌发以及幼苗生长期负调ABA信号 | 第54页 |
4.4 AOX2参与GA信号途径对拟南芥种子萌发的调控 | 第54-56页 |
附录 测序比对结果 | 第56-60页 |
附录A:T-DNA插入突变体aox1a(Salk_084897)测序鉴定结果 | 第56-57页 |
附录B:T-DNA插入突变体aox1c(CS804611)测序鉴定结果 | 第57-58页 |
附录C:T-DNA插入突变体aox2(CS766955)测序鉴定结果 | 第58-59页 |
附录D:表达载体pGWB2-AOX2测序鉴定结果 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-69页 |
在学期间的研究成果 | 第69-70页 |
致谢 | 第70页 |