| 缩略语表 | 第7-9页 |
| 中文摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 文献回顾 | 第17-34页 |
| 第一部分 MIR-543在CCRCC组织和细胞中的表达和意义 | 第34-53页 |
| 1 材料 | 第34-36页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第35页 |
| 1.3 引物序列 | 第35-36页 |
| 1.4 细胞系 | 第36页 |
| 2 实验方法 | 第36-44页 |
| 2.1 组织样品采集 | 第36页 |
| 2.2 细胞的冻存、复苏及传代 | 第36-40页 |
| 2.3 细胞转染 | 第40页 |
| 2.4 组织和细胞总RNA提取及定量 | 第40-41页 |
| 2.5 miRNA逆转录 | 第41-42页 |
| 2.6 实时荧光定量PCR(RealtimequantitativePCR,RT-qPCR) | 第42-43页 |
| 2.7 细胞增殖实验 | 第43页 |
| 2.8 细胞周期检测 | 第43页 |
| 2.9 细胞凋亡检测 | 第43-44页 |
| 2.10 细胞侵袭(Transwell)实验 | 第44页 |
| 2.11 统计分析 | 第44页 |
| 3 结果 | 第44-50页 |
| 3.1 miR-543在ccRCC组织及细胞系中的表达上调 | 第44-46页 |
| 3.2 miR-543促进ccRCC细胞增殖 | 第46-47页 |
| 3.3 miR-543对ccRCC细胞细胞周期的影响 | 第47-48页 |
| 3.4 miR-543对ccRCC细胞凋亡的影响 | 第48-49页 |
| 3.5 miR-543对ccRCC细胞侵袭的影响 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 第二部分 MIR-543对KLF6的表达调控 | 第53-69页 |
| 1 材料 | 第53-54页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第53页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第53页 |
| 1.3 引物序列 | 第53-54页 |
| 1.4 细胞系 | 第54页 |
| 2 实验方法 | 第54-60页 |
| 2.1 生物信息学分析 | 第54页 |
| 2.2 细胞冻存、复苏及传代培养 | 第54页 |
| 2.3 荧光素酶载体构建及酶活性分析 | 第54页 |
| 2.4 细胞转染 | 第54-55页 |
| 2.5 组织或细胞总RNA提取 | 第55页 |
| 2.6 逆转录 | 第55-56页 |
| 2.7 RT-qPCR | 第56-57页 |
| 2.8 细胞蛋白提取及定量 | 第57-58页 |
| 2.9 Westernblot检测相关蛋白指标 | 第58-59页 |
| 2.10 统计分析 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-65页 |
| 3.1 miR-543与KLF6的靶向调控位点预测 | 第60页 |
| 3.2 KLF63’-UTR荧光素酶报告载体转染细胞中miR-543表达水平 | 第60-61页 |
| 3.3 miR-543抑制KLF63’-UTR荧光素酶活性 | 第61-62页 |
| 3.4 miR-543抑制KLF6的表达 | 第62-63页 |
| 3.5 ccRCC组织中miR-543与KLF6表达相关性分析 | 第63-64页 |
| 3.6 miR-543对KLF6下游基因p21的表达调控 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-69页 |
| 第三部分 MIR-543与KLF6在CCRCC细胞中的调控关系 | 第69-92页 |
| 1 材料 | 第69-70页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第69页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第69页 |
| 1.3 引物序列 | 第69页 |
| 1.4 细胞系 | 第69-70页 |
| 2 方法 | 第70-76页 |
| 2.1 细胞冻存、复苏迹传代培养 | 第70-71页 |
| 2.2 过表达载体构建 | 第71页 |
| 2.3 细胞转染 | 第71页 |
| 2.4 细胞总RNA提取 | 第71-72页 |
| 2.5 mRNA逆转录 | 第72-73页 |
| 2.6 RT-qPCR | 第73页 |
| 2.7 细胞蛋白提取及定量 | 第73-74页 |
| 2.8 Westernblot检测相关蛋白指标 | 第74页 |
| 2.9 细胞增殖实验 | 第74-75页 |
| 2.10 细胞周期检测 | 第75页 |
| 2.11 细胞凋亡检测 | 第75-76页 |
| 2.12 细胞侵袭实验 | 第76页 |
| 2.13 统计分析 | 第76页 |
| 3 结果 | 第76-88页 |
| 3.1 KLF6过表达逆转miR-543过表达对KLF6及下游基因表达的抑制 | 第76-79页 |
| 3.2 KLF6过表达逆转miR-543过表达对细胞增殖和周期的影响 | 第79-80页 |
| 3.3 KLF6过表达逆转miR-543过表达对细胞凋亡的影响 | 第80-81页 |
| 3.4 KLF6过表达逆转miR-543过表达对细胞侵袭的影响 | 第81-82页 |
| 3.5 KLF6表达沉默逆转miR-543沉默对KLF6及下游基因表达的抑制 | 第82-85页 |
| 3.6 KLF6表达沉默逆转miR-543表达沉默对细胞增殖和周期的影响 | 第85-86页 |
| 3.7 KLF6表达沉默逆转miR-543表达沉默对细胞凋亡的影响 | 第86-87页 |
| 3.8 KLF6表达沉默逆转miR-543表达沉默对细胞侵袭的影响 | 第87-88页 |
| 4 讨论 | 第88-92页 |
| 小结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-111页 |
| 个人简历和研究成果 | 第111-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
