| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第12-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-23页 |
| 1.1 禽流感研究进展 | 第14-16页 |
| 1.1.1 禽流感病毒 | 第14-15页 |
| 1.1.2 禽流感疫苗的研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2 鸡卵黄抗体IgY | 第16-17页 |
| 1.3 新生儿Fc受体(FcRn)的研究进展 | 第17页 |
| 1.4 鸡卵黄抗体IgY Fc受体(FcRy)的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.4.1 FcRy的结构 | 第18页 |
| 1.4.2 FcRy与IgY的相互作用 | 第18-19页 |
| 1.5 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统概述 | 第19-20页 |
| 1.6 家禽呼吸道黏膜免疫系统 | 第20-23页 |
| 1.6.1 鼻相关淋巴组织(NALTs) | 第21页 |
| 1.6.2 呼吸道黏膜免疫的主要效应因子sIgA | 第21页 |
| 1.6.3 黏膜佐剂CpG-ODN | 第21-23页 |
| 2 目的意义 | 第23-24页 |
| 3 材料方法 | 第24-48页 |
| 3.1 材料 | 第24-29页 |
| 3.1.1 菌株、细胞与实验动物 | 第24页 |
| 3.1.2 质粒、蛋白与抗体 | 第24页 |
| 3.1.3 主要药品与试剂 | 第24页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第24-25页 |
| 3.1.5 主要抗生素与培养基的配制 | 第25-26页 |
| 3.1.6 主要试剂的配制 | 第26-29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-48页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第29-30页 |
| 3.2.2 H9N2病毒RNA的提取 | 第30页 |
| 3.2.3 H9N2 HA1_9基因的RT-PCR扩增 | 第30-31页 |
| 3.2.4 pGEX-KG-HA1_9原核表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.2.5 GST-HA1_9融合蛋白的表达与纯化 | 第32-34页 |
| 3.2.6 抗禽流感病毒H9N1HA1多克隆抗体的制备 | 第34-35页 |
| 3.2.7 sHA1_9-HA1_5-Fc和sHA1_9-Fc融合基因的扩增 | 第35页 |
| 3.2.8 pFastBac HTb-sHA1_9-HA1_5-Fc和pFastBac HTb-sHA1_9-Fc真核表达载体的构建.. | 第35-36页 |
| 3.2.9 pFastBac HTb-sHA1_9-HA1_5-Fc和pFastBac HTb-sHA1_9-Fc重组质粒的转座 | 第36-37页 |
| 3.2.10 重组穿梭质粒Bacmid的提取与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.11 重组阳性杆粒Bacmid转染Sf9细胞 | 第38-40页 |
| 3.2.12 杆状病毒的扩增 | 第40-41页 |
| 3.2.13 重组sHA1_9-HA1_5-Fc和sHA1_9-Fc融合蛋白的表达 | 第41页 |
| 3.2.14 sHA1_9-HA1_5-Fc和sHA1_9-Fc融合蛋白的SDS-PAGE和Western Blot检测 | 第41-42页 |
| 3.2.15 间接免疫荧光实验 | 第42页 |
| 3.2.16 sHA1_9-HA1_5-Fc和sHA1_9-Fc融合蛋白的大量表达与纯化 | 第42-43页 |
| 3.2.17 融合蛋白跨越鸡呼吸道黏膜屏障的检测 | 第43-44页 |
| 3.2.18 滴鼻和皮下接种鸡的免疫效果检测 | 第44-48页 |
| 4 结果 | 第48-62页 |
| 4.1 pGEX-KG-HA1_9原核表达载体的构建 | 第48页 |
| 4.2 pFastBac HTb-sHA1_9-HA1_5-Fc和pFastBac HTb-sHA1_9-Fc真核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 4.3 阳性重组穿梭质粒Bacmid的鉴定 | 第49-50页 |
| 4.4 重组阳性穿梭杆粒Bacmid转染Sf9细胞 | 第50-51页 |
| 4.5 GST-HA1_9融合蛋白的表达 | 第51页 |
| 4.6 鼠抗H9N2 HA1多克隆抗体的制备 | 第51-52页 |
| 4.7 sHA1_9-HA1_5-Fc和sHA1_9-Fc融合蛋白的SDS-PAGE与Western Blot鉴定 | 第52-53页 |
| 4.8 融合蛋白的间接免疫荧光实验检测 | 第53页 |
| 4.9 非还原条件下sHA1_9-HA1_5-Fc和sHA1_9-Fc融合蛋白的Western Blot检测 | 第53-54页 |
| 4.10 融合蛋白跨越鸡呼吸道黏膜屏障的检测 | 第54-55页 |
| 4.11 融合蛋白免疫鸡的效果检测 | 第55-60页 |
| 4.11.1 血清特异性IgY抗体效价检测 | 第55-56页 |
| 4.11.2 血凝抑制(HI)效价检测 | 第56-57页 |
| 4.11.3 呼吸道局部黏膜特异性sIgA和IgY抗体水平的检测 | 第57-59页 |
| 4.11.4 脾淋巴细胞增殖实验 | 第59-60页 |
| 4.11.5 血清中细胞因子的检测 | 第60页 |
| 4.12 免疫鸡H9N2禽流感病毒攻毒后分离实验结果 | 第60-62页 |
| 5 讨论 | 第62-65页 |
| 5.1 目的蛋白的表达 | 第62页 |
| 5.2 鸡免疫效果的评价 | 第62-65页 |
| 6 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
