| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略语(Abbreviation) | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-21页 |
| 1.1 炎症反应 | 第14页 |
| 1.1.1 概述 | 第14页 |
| 1.1.2 脂多糖 | 第14页 |
| 1.2 大麻素 | 第14-15页 |
| 1.3 内源性大麻素系统 | 第15-18页 |
| 1.3.1 概述 | 第15页 |
| 1.3.2 CB受体及其信号传导 | 第15-16页 |
| 1.3.3 内源性大麻素样物质及其合成和代谢 | 第16-17页 |
| 1.3.4 大麻素样物质的转运 | 第17-18页 |
| 1.3.5 大麻素样物质对免疫系统的调节 | 第18页 |
| 1.4 哺乳动物羧酸酯酶 | 第18-20页 |
| 1.4.1 概述 | 第18页 |
| 1.4.2 羧酸酯酶的分类和分布 | 第18-19页 |
| 1.4.3 羧酸酯酶的功能 | 第19页 |
| 1.4.4 羧酸酯酶的抑制剂 | 第19-20页 |
| 1.4.5 羧酸酯酶的应用 | 第20页 |
| 1.5 猪肝羧酸酯酶 | 第20-21页 |
| 1.5.1 概述 | 第20页 |
| 1.5.2 猪肝羧酸酯酶的同工酶 | 第20-21页 |
| 1.5.3 猪肝羧酸酯酶的基因序列 | 第21页 |
| 2 研究的目的与意义 | 第21-22页 |
| 3 材料与方法 | 第22-43页 |
| 3.1 研究材料 | 第22-25页 |
| 3.1.1 肝组织和大麻素 | 第22页 |
| 3.1.2 质粒及菌株 | 第22页 |
| 3.1.3 主要试剂及配置 | 第22-24页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 3.1.5 主要分析软件 | 第25页 |
| 3.2 研究方法 | 第25-43页 |
| 3.2.1 LC-MS/MS检测方法的建立 | 第25页 |
| 3.2.2 PLE的原核功能性表达与纯化 | 第25-28页 |
| 3.2.3 LC-MS/MS检测PLE1/PLE6体外水解大麻素 | 第28-29页 |
| 3.2.4 LC-MS/MS检测成年猪肝脏S9体外水解大麻素 | 第29页 |
| 3.2.5 液液萃取培养基中大麻素方法建立 | 第29-30页 |
| 3.2.6 LC-MS/MS检测真核表达的PLE6细胞水平水解大麻素 | 第30-33页 |
| 3.2.7 共培养细胞模型的建立及研究 | 第33-42页 |
| 3.2.8 AA对PLE酶活性的影响 | 第42-43页 |
| 4 结果与分析 | 第43-64页 |
| 4.1 LC-MS/MS检测大麻素及其水解产物方法 | 第43-44页 |
| 4.2 原核功能性表达的PLE体外水解大麻素 | 第44-47页 |
| 4.2.1 纯化原核功能性表达的PLE | 第44-46页 |
| 4.2.2 PLE蛋白浓度 | 第46页 |
| 4.2.3 PLE的活性 | 第46页 |
| 4.3.4 原核功能性表达PLE体外水解大麻素 | 第46-47页 |
| 4.3 成年大白猪肝脏S9体外水解大麻素 | 第47-49页 |
| 4.3.1 成年猪肝脏S9中本底大麻素及花生四烯酸 | 第47页 |
| 4.3.2 成年猪肝脏S9水解大麻素酶活性 | 第47-48页 |
| 4.3.3 BNPP抑制成年猪肝脏S9水解大麻素酶活性 | 第48-49页 |
| 4.4 过表达PLE6的细胞水解大麻素 | 第49-51页 |
| 4.4.1 液液萃取回收率 | 第49页 |
| 4.4.2 Western Blot检测真核表达的PLE6 | 第49-50页 |
| 4.4.3 过表达的PLE6水解2-AG | 第50-51页 |
| 4.5 10日龄大白公猪原代细胞的分离、培养及研究 | 第51-53页 |
| 4.5.1 10日龄大白公猪原代肝细胞的分离及培养 | 第51页 |
| 4.5.2 WesternBlot检测细胞中PLE | 第51-52页 |
| 4.5.3 BNPP处理的原代细胞中PLE | 第52页 |
| 4.5.4 BNPP抑制的原代猪肝细胞PLE酶活力 | 第52-53页 |
| 4.6 25日龄大白猪原代细胞的分离及研究 | 第53-59页 |
| 4.6.125 日龄大白公猪原代猪肝细胞/KCs/淋巴细胞的分离及培养 | 第53页 |
| 4.6.225 日龄大白公猪原代KCs的分离及鉴定 | 第53-55页 |
| 4.6.3 RT-qPCR检测大麻素对炎症反应的作用 | 第55页 |
| 4.6.4 RT-qPCR检测PLE对炎症反应的作用 | 第55-56页 |
| 4.6.5 蛋白质芯片检测大麻素对炎症反应的作用 | 第56-57页 |
| 4.6.6 蛋白质芯片检测PLE对炎症反应的作用 | 第57页 |
| 4.6.7 蛋白质芯片检测BNPP对炎症反应的作用 | 第57-59页 |
| 4.7 原代猪肝细胞/MODC/KCS/肺泡巨噬细胞系共培养及研究 | 第59-63页 |
| 4.7.1 RT-qPCR检测大麻素对炎症反应的作用 | 第59页 |
| 4.7.2 PLE1和PLE6对共培养细胞炎症反应的调节 | 第59-61页 |
| 4.7.3 BNPP对共培养细胞炎症反应的调节 | 第61-62页 |
| 4.7.4 JZL184对共培养细胞炎症反应的调节 | 第62-63页 |
| 4.8 AA抑制PLE6酶活力 | 第63-64页 |
| 5 讨论 | 第64-69页 |
| 5.1 共培养细胞模型的建立 | 第64-65页 |
| 5.2 原代猪肝细胞的分离及培养 | 第65-66页 |
| 5.3 原代枯否氏细胞的分离及培养 | 第66页 |
| 5.4 萃取方法的建立 | 第66-67页 |
| 5.5 细胞水平水解大麻素条件的建立 | 第67页 |
| 5.6 原核功能性表达的PLE水解大麻素 | 第67页 |
| 5.7 PLE对炎症反应的调控 | 第67-69页 |
| 6 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 在读期间申请专利和发表文章题录 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
