| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 英文缩略表 | 第18-20页 |
| 第一章 引言 | 第20-35页 |
| 1.1 黄曲霉菌 | 第20-23页 |
| 1.1.1 黄曲霉菌的分布及危害 | 第20-21页 |
| 1.1.2 黄曲霉菌的检测 | 第21-23页 |
| 1.2 黄曲霉毒素 | 第23-28页 |
| 1.2.1 黄曲霉毒素的发生及危害 | 第23页 |
| 1.2.2 黄曲霉毒素的生物合成 | 第23-25页 |
| 1.2.3 黄曲霉毒素合成的关键基因 | 第25-28页 |
| 1.3 基因工程抗体 | 第28-30页 |
| 1.3.1 基因工程抗体主要类型 | 第28-29页 |
| 1.3.2 纳米抗体 | 第29-30页 |
| 1.4 噬菌体展示技术 | 第30-33页 |
| 1.4.1 噬菌体展示系统 | 第31页 |
| 1.4.2 噬菌体展示纳米抗体文库的构建 | 第31-32页 |
| 1.4.3 噬菌体展示系统的筛选 | 第32-33页 |
| 1.5 本课题的研究目的和意义 | 第33-34页 |
| 1.6 本课题的研究内容 | 第34-35页 |
| 第二章 黄曲霉菌特异纳米抗体的研制 | 第35-65页 |
| 2.1 引言 | 第35页 |
| 2.2 材料 | 第35-39页 |
| 2.2.1 仪器与耗材 | 第35-36页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第36-37页 |
| 2.2.3 菌株、载体及引物 | 第37-38页 |
| 2.2.4 实验溶液和培养基 | 第38-39页 |
| 2.3 方法 | 第39-49页 |
| 2.3.1 黄曲霉菌抗原的制备 | 第39-40页 |
| 2.3.2 黄曲霉菌多克隆抗体的制备 | 第40-41页 |
| 2.3.3 黄曲霉菌噬菌体展示纳米抗体基因库的构建 | 第41-45页 |
| 2.3.4 黄曲霉菌纳米抗体的淘选 | 第45-46页 |
| 2.3.5 黄曲霉菌纳米抗体的表达及纯化 | 第46-47页 |
| 2.3.6 纳米抗体的抗原结合分析 | 第47-48页 |
| 2.3.7 Sandwich-ELISA方法的建立 | 第48-49页 |
| 2.4 结果与分析 | 第49-62页 |
| 2.4.1 黄曲霉菌多克隆抗体制备 | 第49-51页 |
| 2.4.2 羊驼免疫效果检测 | 第51-52页 |
| 2.4.3 黄曲霉菌噬菌体展示纳米抗体文库的构建 | 第52-54页 |
| 2.4.4 黄曲霉菌纳米抗体的淘选 | 第54页 |
| 2.4.5 阳性噬菌体克隆的鉴定与序列分析 | 第54-56页 |
| 2.4.6 黄曲霉菌纳米抗体的表达与纯化 | 第56页 |
| 2.4.7 纳米抗体的抗原结合分析 | 第56-59页 |
| 2.4.8 Sandwich-ELISA的建立 | 第59-60页 |
| 2.4.9 对样品检测的最低定量限 | 第60-61页 |
| 2.4.10 Sandwich-ELISA方法对样品检测 | 第61-62页 |
| 2.5 讨论 | 第62-64页 |
| 2.6 小结 | 第64-65页 |
| 第三章 黄曲霉毒素生物合成中关键调控蛋白AFLR纳米抗体的研制 | 第65-85页 |
| 3.1 引言 | 第65页 |
| 3.2 材料 | 第65-68页 |
| 3.2.1 仪器与耗材 | 第65-66页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第66-67页 |
| 3.2.3 菌株、载体及引物 | 第67页 |
| 3.2.4 实验溶液和培养基 | 第67-68页 |
| 3.3 方法 | 第68-74页 |
| 3.3.1 调控蛋白AFLR的克隆与表达 | 第68-70页 |
| 3.3.2 AFLR纳米抗体基因库的构建 | 第70-71页 |
| 3.3.3 AFLR纳米抗体的淘选 | 第71-72页 |
| 3.3.4 AFLR纳米抗体的表达与纯化 | 第72页 |
| 3.3.5 纳米抗体的抗原结合分析 | 第72-73页 |
| 3.3.6 Sandwich-ELISA方法的建立 | 第73-74页 |
| 3.4 结果与分析 | 第74-83页 |
| 3.4.1 AFLR蛋白的克隆与表达 | 第74-75页 |
| 3.4.2 羊驼免疫效果检测 | 第75-76页 |
| 3.4.3 AFLR噬菌体展示纳米抗体文库的构建 | 第76页 |
| 3.4.4 AFLR纳米抗体的淘选 | 第76页 |
| 3.4.5 阳性噬菌体克隆的鉴定与序列分析 | 第76-77页 |
| 3.4.6 AFLR纳米抗体的表达与纯化 | 第77-78页 |
| 3.4.7 纳米抗体的抗原结合分析 | 第78-81页 |
| 3.4.8 Sandwich-ELISA的建立 | 第81-82页 |
| 3.4.9 Sandwich-ELISA法检测不同产毒菌株的天然AFLR蛋白 | 第82-83页 |
| 3.5 讨论 | 第83-84页 |
| 3.5.1 AFLR纳米抗体的制备 | 第83-84页 |
| 3.5.2 黄曲霉毒素积累量的影响因素 | 第84页 |
| 3.5.3 AFLR纳米抗体的应用前景 | 第84页 |
| 3.6 小结 | 第84-85页 |
| 第四章 黄曲霉毒素生物合成关键酶AFLD、AFLM、AFLP单克隆抗体的研制 | 第85-104页 |
| 4.1 引言 | 第85页 |
| 4.2 材料 | 第85-87页 |
| 4.2.1 仪器与耗材 | 第85-86页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第86页 |
| 4.2.3 菌株、载体及引物 | 第86-87页 |
| 4.2.4 实验溶液和培养基 | 第87页 |
| 4.2.5 细胞和实验动物 | 第87页 |
| 4.3 方法 | 第87-94页 |
| 4.3.1 关键酶AFLD、AFLM和AFLP的克隆与表达 | 第87-89页 |
| 4.3.2 AFLD、AFLM和AFLP的单克隆抗体的制备 | 第89-94页 |
| 4.4 结果与分析 | 第94-102页 |
| 4.4.1 AFLD、AFLM和AFLP重组蛋白的克隆与表达 | 第94-95页 |
| 4.4.2 小鼠免疫效果检测 | 第95-97页 |
| 4.4.3 杂交瘤细胞株的筛选 | 第97-102页 |
| 4.5 讨论 | 第102页 |
| 4.6 小结 | 第102-104页 |
| 第五章 全文结论 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 作者简历 | 第117页 |
