| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| abstract | 第9-10页 |
| 第一章 绪论 | 第17-24页 |
| 1.1 植物生长发育概述 | 第17页 |
| 1.2 CDT1基因的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3 DDB1基因的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 植物遗传转化方法及应用进展 | 第19-21页 |
| 1.5 植物组织培养原理及番茄转基因的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.6 本课题的研究目的、内容和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 质粒载体 | 第24页 |
| 2.2 试剂及培养基配置 | 第24-34页 |
| 2.2.1 常用试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.2 分子实验常用试剂培养基配置 | 第25-26页 |
| 2.2.3 番茄组织培养所需试剂和培养基的配置 | 第26-30页 |
| 2.2.4 瞬时表达系统相关试剂的配置 | 第30-32页 |
| 2.2.5 免疫共沉淀相关试剂配置 | 第32-34页 |
| 2.2.6 植物组织石蜡切片相关试剂配置 | 第34页 |
| 2.3 分子实验方法 | 第34-42页 |
| 2.3.1 载体构建的基本步骤 | 第34-35页 |
| 2.3.2 番茄总RNA的提取 | 第35页 |
| 2.3.3 番茄mRNA反转成cDNA | 第35页 |
| 2.3.4 引物设计要求 | 第35-36页 |
| 2.3.5 PCR反应体系和程序 | 第36-37页 |
| 2.3.6 连接转化 | 第37-38页 |
| 2.3.7 单克隆的挑取 | 第38页 |
| 2.3.8 核酸检测琼脂糖凝胶电泳 | 第38页 |
| 2.3.9 质粒提取 | 第38-39页 |
| 2.3.10 酶切鉴定(20uL) | 第39页 |
| 2.3.11 测序 | 第39页 |
| 2.3.12 酶切胶回收 | 第39页 |
| 2.3.13 DNA片段与pBI载体的连接 | 第39-40页 |
| 2.3.14 大肠杆菌DH5α感受态的制备与转化 | 第40页 |
| 2.3.15 农杆菌EH105α菌株感受态的制备、转化与储藏 | 第40-41页 |
| 2.3.16 高压蒸汽灭菌及过滤除菌 | 第41-42页 |
| 2.4 组培的实验方法及步骤 | 第42-44页 |
| 2.4.1 番茄种子的萌发与清洗 | 第42页 |
| 2.4.2 预培养 | 第42页 |
| 2.4.3 农杆菌侵染及共培养 | 第42-43页 |
| 2.4.4 抗性培养基筛选 | 第43页 |
| 2.4.5 根的诱导 | 第43页 |
| 2.4.6 炼苗与移栽 | 第43页 |
| 2.4.7 番茄植株的培养条件 | 第43-44页 |
| 2.5 转基因植株阳性鉴定 | 第44-45页 |
| 2.5.1 DNA阳性鉴定 | 第44页 |
| 2.5.2 RNA阳性鉴定及半定量分析 | 第44-45页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第45-59页 |
| 3.1 生物信息学分析 | 第45-47页 |
| 3.1.1 番茄SlCDT1基因的确定 | 第45页 |
| 3.1.2 番茄SlCDT1基因保守结构域分析 | 第45页 |
| 3.1.3 番茄SlCDT1基因定位分析 | 第45-46页 |
| 3.1.4 番茄SlCDT1蛋白理化性质分析 | 第46页 |
| 3.1.5 番茄SlCDT1蛋白结构分析 | 第46-47页 |
| 3.1.6 番茄SlCDT1蛋白的表达量分析 | 第47页 |
| 3.2 番茄SlCDT1基因片段的获得 | 第47-48页 |
| 3.3 SlCDT1蛋白表达的亚细胞定位 | 第48-49页 |
| 3.4 植物表达载体的构建 | 第49-51页 |
| 3.4.1 番茄SlCDT1基因连接pEASY-Blunt载体 | 第49-50页 |
| 3.4.2 番茄SlCDT1基因连接植物表达载体pBTEX35S::HA载体 | 第50-51页 |
| 3.4.3 将SlCDT1HA基因片段连接到pBI::35S载体 | 第51页 |
| 3.4.4 将pBI35S-SlCDT1HA载体转入农杆菌 | 第51页 |
| 3.5 番茄植株的组织培养 | 第51-53页 |
| 3.5.1 愈伤组织的诱导 | 第51-52页 |
| 3.5.2 愈伤组织的分化 | 第52页 |
| 3.5.3 完整植株的生根及移栽 | 第52-53页 |
| 3.6 转基因阳性植株鉴定 | 第53-54页 |
| 3.7 半定量分析转基因番茄植株中SlCDT1的转录水平 | 第54页 |
| 3.8 SlCDT1过量表达影响番茄植株的株型 | 第54-55页 |
| 3.9 SlCDT1过量表达影响番茄果实的叶绿素水平 | 第55-56页 |
| 3.10 转基因番茄植株中质体发育相关基因的转录水平 | 第56页 |
| 3.11 转基因番茄植株中细胞周期相关基因的转录水平 | 第56-57页 |
| 3.12 SlCDT1与番茄CUL4、DDB1、DET1蛋白复合体的相互作用 | 第57-58页 |
| 3.13 SlCDT1与泛素分子Ub的相互作用 | 第58-59页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第59-61页 |
| 4.1 结论与讨论 | 第59-60页 |
| 4.2 后续的工作展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第67-68页 |
