| 摘要 | 第4-6页 |
| Summary | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第9-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-32页 |
| 1 牦牛生殖特性 | 第16-17页 |
| 2 雌性哺乳动物性生殖器官生理功能 | 第17-18页 |
| 2.1 卵巢生理功能调控 | 第17-18页 |
| 2.2 输卵管、子宫生理功能 | 第18页 |
| 3 蛋白组学技术在生殖研究上的应用 | 第18-22页 |
| 4 非标记定量蛋白质组学(Label-free)的优势 | 第22页 |
| 5 生殖系统与蛋白组学研究 | 第22-27页 |
| 5.1 子宫与蛋白组学研究 | 第22-23页 |
| 5.2 卵巢与蛋白组学研究 | 第23-27页 |
| 5.2.1 多囊卵巢综合征(PCOS) | 第23-24页 |
| 5.2.2 蛋白质组学在卵泡发育中的研究 | 第24-25页 |
| 5.2.3 胚胎与蛋白质组学 | 第25-27页 |
| 6 卵泡刺激素和黄体生成素的生理学意义 | 第27-31页 |
| 6.1 FSHR和LHR在雌性生殖器官中的调控作用 | 第28-29页 |
| 6.1.1 FSHR的结构特点 | 第28页 |
| 6.1.2 LHR的结构特点 | 第28-29页 |
| 6.2 FSHR和LHR对卵泡的调控 | 第29-31页 |
| 7 研究目的与技术路线 | 第31-32页 |
| 第二章 Lable-free定量蛋白组学筛选牦牛黄体期和卵泡期卵巢相关差异蛋白 | 第32-64页 |
| 1 材料与方法 | 第32-37页 |
| 1.1 材料 | 第32-33页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第32-33页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第33页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第33页 |
| 1.2 实验方法 | 第33-37页 |
| 1.2.1 蛋白提取 | 第33页 |
| 1.2.2 蛋白浓度测量 | 第33-34页 |
| 1.2.3 蛋白质SDS-PAGE电泳检测 | 第34页 |
| 1.2.4 蛋白Trypsin酶解 | 第34页 |
| 1.2.5 质谱分析 | 第34-36页 |
| 1.2.6 Lable-free蛋白组学定量分析 | 第36-37页 |
| 2 实验结果 | 第37-60页 |
| 2.1 牦牛卵巢组织蛋白质的提取及电泳检测 | 第37-38页 |
| 2.2 蛋白质质谱鉴定 | 第38-41页 |
| 2.2.1 数量及肽段特征 | 第38-40页 |
| 2.2.2 蛋白质分子质量及等电点鉴定结果 | 第40-41页 |
| 2.3 鉴定蛋白黄体期与卵泡期出现的频率及韦恩(Venn)图分析 | 第41-42页 |
| 2.4 牦牛黄体期和卵泡期卵巢组织差异蛋白筛选 | 第42-47页 |
| 2.5 黄体期和卵泡期卵巢组织中差异表达蛋白的生物信息学分析 | 第47-60页 |
| 2.5.1 牦牛黄体期和卵泡期卵巢差异蛋白的GO分析 | 第47页 |
| 2.5.2 牦牛黄体期和卵泡期卵巢差异蛋白的COG分析 | 第47-49页 |
| 2.5.3 牦牛黄体期和卵泡期卵巢差异表达蛋白的KEGG分析 | 第49-51页 |
| 2.5.4 牦牛黄体期和卵泡期卵巢差异蛋白的蛋白互作分析 | 第51-53页 |
| 2.5.5 黄体期与卵泡期的聚类分析(clusteranalysis) | 第53-55页 |
| 2.5.6 差异蛋白中未知蛋白功能分析与预测 | 第55-57页 |
| 2.5.7 差异蛋白StAR、Rab-8A和HSP | 第57-60页 |
| 3 讨论 | 第60-64页 |
| 第三章 FSHR、LHR和部分差异蛋白的定量及定位研究 | 第64-86页 |
| 1 引言 | 第64-66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-76页 |
| 2.1 实验动物 | 第66页 |
| 2.2 样本采集及处理 | 第66页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第66页 |
| 2.4 试剂及引物合成 | 第66-67页 |
| 2.5 主要试剂配制 | 第67-68页 |
| 2.6 FSHR、LHR、STAR、Rab-8a、HSP105基因在牦牛黄体期和卵泡期表达差异的测定 | 第68-73页 |
| 2.6.1 牦牛黄体期和卵泡期卵巢、子宫及输卵管总RNA提取及检测 | 第68-69页 |
| 2.6.2 牦牛不同组织总RNA检测 | 第69-70页 |
| 2.6.3 反转录生成cDNA | 第70-71页 |
| 2.6.4 扩增引物的设计 | 第71页 |
| 2.6.5 目的基因及引物的鉴定 | 第71-73页 |
| 2.7 免疫组化法测定各基因在牦牛各时期不同组织的分布 | 第73-75页 |
| 2.7.1 制作黏附载玻片 | 第73页 |
| 2.7.2 组织石蜡包埋与切片 | 第73-74页 |
| 2.7.3 FSHR、LHR、StAR、Rab-8a、HSP105的免疫组化染色 | 第74-75页 |
| 2.8 Westernblot实验研究 | 第75页 |
| 2.8.1 蛋白样品制备 | 第75页 |
| 2.8.2 SDS-PAGE电泳和免疫印迹检测 | 第75页 |
| 2.9 数据处理与统计 | 第75-76页 |
| 3 实验结果 | 第76-82页 |
| 3.1 牦牛卵巢、子宫和输卵管组织总RNA的纯度检测 | 第76页 |
| 3.2 FSHR、LHR、StAR、Rab-8a、HSP105在牦牛卵巢、子宫和输卵管的表达与溶解曲线分析 | 第76页 |
| 3.3 FSHR、LHR、StAR、Rab-8a、HSP105在黄体期及卵泡期牦牛卵巢、子宫和输卵管基因转录水平 | 第76-77页 |
| 3.4 蛋白质水平表达鉴定 | 第77-78页 |
| 3.5 免疫组化相关测定结果 | 第78-82页 |
| 3.5.1 黄体期牦牛各组织中FSHR、LHR、StAR、Rab-8a和HSP定位表达情况 | 第78-80页 |
| 3.5.2 卵泡期牦牛各组织中FSHR、LHR、StAR、Rab-8a和HSP定位表达情况 | 第80-82页 |
| 4 讨论 | 第82-86页 |
| 5 小结 | 第86页 |
| 第四章 总结与展望 | 第86-88页 |
| 1 总结 | 第86-87页 |
| 2 展望 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 导师简介 | 第103-104页 |
| 个人简介 | 第104-105页 |
| 附录 | 第105-115页 |
