| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-31页 |
| 1.1 山羊奶脂肪酸组成及其营养价值 | 第15-16页 |
| 1.2 乳腺脂肪酸合成 | 第16-17页 |
| 1.2.1 乳腺细胞外源吸收脂肪酸 | 第16-17页 |
| 1.2.2 乳腺细胞从头合成脂肪酸 | 第17页 |
| 1.3 脂肪酸合酶基因与脂肪酸代谢 | 第17-21页 |
| 1.3.1 脂肪酸合酶基因的结构和功能 | 第17-18页 |
| 1.3.2 FASN基因的表达调控 | 第18-20页 |
| 1.3.3 脂肪酸合酶与疾病和信号分子的关系 | 第20-21页 |
| 1.4 脂肪酸代谢相关重要调控因子和调控网络研究进展 | 第21-27页 |
| 1.4.1 SREBP1 | 第21-22页 |
| 1.4.2 LXR | 第22-23页 |
| 1.4.3 PPAR | 第23页 |
| 1.4.4 USF1 | 第23-25页 |
| 1.4.5 转录因子网络对脂质代谢的调控 | 第25-27页 |
| 1.5 启动子研究的常用方法及技术研究进展 | 第27-29页 |
| 1.5.1 启动子的克隆 | 第27页 |
| 1.5.2 启动子的生物信息学分析和预测 | 第27-28页 |
| 1.5.3 启动子分析方法 | 第28-29页 |
| 1.5.4 过表达或干扰反式作用因子 | 第29页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第29-31页 |
| 第二章 FASN启动子的克隆与生物信息学分析 | 第31-42页 |
| 2.1 材料与方法 | 第31-35页 |
| 2.1.1 材料 | 第31页 |
| 2.1.2 FASN基因启动子的克隆 | 第31-32页 |
| 2.1.3 FASN启动子序列的生物信息学分析 | 第32页 |
| 2.1.4 FASN启动子缺失片段的克隆与载体构建 | 第32-34页 |
| 2.1.5 细胞培养 | 第34页 |
| 2.1.6 转染 | 第34-35页 |
| 2.1.7 荧光素酶活性检测 | 第35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-39页 |
| 2.2.1 山羊FASN启动子的克隆 | 第35页 |
| 2.2.2 山羊FASN启动子的生物信息学分析 | 第35-37页 |
| 2.2.3 FASN启动子缺失片段报告基因载体构建 | 第37-38页 |
| 2.2.4 FASN缺失片段启动子活性检测 | 第38-39页 |
| 2.3 讨论 | 第39-41页 |
| 2.3.1 生物信息学分析FASN启动子序列 | 第39页 |
| 2.3.2 FASN启动子的缺失分析 | 第39-40页 |
| 2.3.3 FASN启动子上的转录因子调控 | 第40-41页 |
| 2.4 小结 | 第41-42页 |
| 第三章 SREBP1 调控山羊FASN基因转录活性 | 第42-51页 |
| 3.1 材料与方法 | 第42-45页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第42页 |
| 3.1.2 启动子元件定点突变与荧光素酶载体构建 | 第42-43页 |
| 3.1.3 启动子报告基因载体构建 | 第43页 |
| 3.1.4 SREBP1 过表达载体构建 | 第43-44页 |
| 3.1.5 SREBP1 靶向siRNA的合成与转染 | 第44页 |
| 3.1.6 细胞总RNA提取与cDNA第一链的合成 | 第44页 |
| 3.1.7 实时定量PCR | 第44-45页 |
| 3.1.8 启动子报告基因载体瞬时转染 | 第45页 |
| 3.1.9 荧光素酶活性检测 | 第45页 |
| 3.1.10 数据分析 | 第45页 |
| 3.2 结果与分析 | 第45-49页 |
| 3.2.1 FASN启动子突变体对其活性的影响 | 第45-46页 |
| 3.2.2 过表达SREBP1 对FASN转录活性的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.3 干扰SREBP1 对FASN转录活性的影响 | 第47-48页 |
| 3.2.4 SREs元件在SREBP1 诱导的FASN启动子活性中的作用 | 第48-49页 |
| 3.3 讨论 | 第49-50页 |
| 3.3.1 SREBP1 在乳脂合成中的作用 | 第49页 |
| 3.3.2 FASN启动子上的SRE元件 | 第49-50页 |
| 3.4 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 LXRα 调控山羊FASN基因转录活性的直接和间接作用机制 | 第51-61页 |
| 4.1 材料与方法 | 第51-53页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第51页 |
| 4.1.2 生物信息学预测FASN启动子上的转录因子结合位点 | 第51页 |
| 4.1.3 定点突变 | 第51-52页 |
| 4.1.4 载体构建 | 第52页 |
| 4.1.5 细胞培养及转染 | 第52页 |
| 4.1.6 小干扰RNA设计合成及转染 | 第52页 |
| 4.1.7 启动子报告基因活性检测 | 第52-53页 |
| 4.1.8 RNA提取及RT-qPCR | 第53页 |
| 4.1.9 数据统计分析 | 第53页 |
| 4.2 结果与分析 | 第53-58页 |
| 4.2.1 LXRα 激动剂T0901317 增强山羊FASN基因转录水平 | 第53-54页 |
| 4.2.2 FASN启动子序列LXR应答元件的预测及分析 | 第54-55页 |
| 4.2.3 突变LXRE和SREs元件对FASN启动子活性的影响 | 第55-56页 |
| 4.2.4 T0901317 通过LXRα 和SREBP1 调控FASN启动子活性 | 第56-58页 |
| 4.3 讨论 | 第58-60页 |
| 4.3.1 SREBP1 在T0901317 诱导的脂质生成中的作用 | 第58-59页 |
| 4.3.2 关于LXR激动剂T0901317 处理浓度 | 第59页 |
| 4.3.3 LXRE和SREs元件在FASN基因转录调控中的作用 | 第59-60页 |
| 4.4 小结 | 第60-61页 |
| 第五章 山羊上游刺激因子USF1 对FASN基因启动子活性的影响 | 第61-73页 |
| 5.1 材料与方法 | 第61-65页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第61页 |
| 5.1.2 山羊USF1 基因的克隆 | 第61-63页 |
| 5.1.3 pEF-Neo-Flag-USF1 载体构建及鉴定 | 第63-64页 |
| 5.1.4 USF1 靶向siRNA的合成 | 第64页 |
| 5.1.5 细胞培养及转染 | 第64-65页 |
| 5.1.6 细胞RNA提取及RT-qPCR | 第65页 |
| 5.1.7 荧光素酶报告基因活性检测 | 第65页 |
| 5.1.8 数据统计分析 | 第65页 |
| 5.2 结果与分析 | 第65-71页 |
| 5.2.1 山羊USF1 基因的克隆 | 第65-66页 |
| 5.2.2 山羊USF1 表达载体pEF-Neo-Flag-USF1 的构建及鉴定 | 第66-67页 |
| 5.2.3 USF1 在山羊乳腺上皮细胞中的过表达检测 | 第67-68页 |
| 5.2.4 过表达USF1 对山羊FASN启动子活性的影响 | 第68-69页 |
| 5.2.5 干扰USF1 对山羊FASN启动子活性的影响 | 第69-71页 |
| 5.3 讨论 | 第71-72页 |
| 5.3.1 USF与糖脂代谢 | 第71页 |
| 5.3.2 USF1 调控山羊FASN基因启动子 | 第71-72页 |
| 5.4 小结 | 第72-73页 |
| 第六章 USF1 和SREBP1 协同调控山羊FASN基因转录活性 | 第73-83页 |
| 6.1 材料与方法 | 第73-77页 |
| 6.1.1 实验材料 | 第73页 |
| 6.1.2 引物设计 | 第73-74页 |
| 6.1.3 pEF-Neo-Myc-SREBP1 载体构建及鉴定 | 第74-75页 |
| 6.1.4 pBiFC-VN155-USF1 和pBiFC-VC155-SREBP1 载体构建及鉴定 | 第75页 |
| 6.1.5 细胞培养与转染 | 第75-76页 |
| 6.1.6 荧光素酶报告基因检测 | 第76页 |
| 6.1.7 数据分析 | 第76-77页 |
| 6.2 结果与分析 | 第77-80页 |
| 6.2.1 pEF-Neo-Myc-SREBP1 载体的构建及鉴定 | 第77页 |
| 6.2.2 pBiFC-VC155-SREBP1 和pBiFC-VN155-USF1 载体构建及鉴定 | 第77-79页 |
| 6.2.3 USF1 和SREBP1 协同调控FASN启动子活性 | 第79页 |
| 6.2.4 USF1 和SREBP1 相互结合的BiFC分析 | 第79-80页 |
| 6.3 讨论 | 第80-82页 |
| 6.3.1 双分子荧光互补技术BiFC及其应用 | 第80-81页 |
| 6.3.2 BiFC技术的优缺点 | 第81页 |
| 6.3.3 USF1 和SREBP1 的协同作用 | 第81-82页 |
| 6.4 小结 | 第82-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 本研究的创新点 | 第84-85页 |
| 存在问题及展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-97页 |
| 附录 | 第97-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 作者简介 | 第101页 |
