| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-25页 |
| 1.1 黑曲霉表达系统及异源表达研究 | 第15-18页 |
| 1.1.1 黑曲霉简介 | 第15页 |
| 1.1.2 黑曲霉表达系统 | 第15-17页 |
| 1.1.3 黑曲霉表达系统中异源蛋白的表达研究 | 第17-18页 |
| 1.2 表面展示系统及其研究 | 第18-21页 |
| 1.2.1 噬菌体表面展示技术 | 第19页 |
| 1.2.2 细菌表面展示系统 | 第19页 |
| 1.2.3 酵母表面展示系统 | 第19-20页 |
| 1.2.4 丝状真菌表面展示系统 | 第20页 |
| 1.2.5 表面展示系统的应用 | 第20-21页 |
| 1.3 EtMIC2蛋白及其应用研究 | 第21-23页 |
| 1.3.1 鸡球虫病的研究 | 第21-22页 |
| 1.3.2 EtMIC抗原蛋白简介 | 第22页 |
| 1.3.3 EtMIC2的应用及研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-43页 |
| 2.1 材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 菌株、载体、实验动物 | 第25页 |
| 2.1.2 引物、载体、酶和试剂盒 | 第25页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-43页 |
| 2.2.1 溶液与培养基的配制 | 第26-30页 |
| 2.2.2 目的基因的扩增 | 第30-31页 |
| 2.2.3 黑曲霉菌株的活化与保存 | 第31页 |
| 2.2.4 黑曲霉孢子制备 | 第31页 |
| 2.2.5 黑曲霉培养物对肉雏鸡动物安全性试验 | 第31-33页 |
| 2.2.6 黑曲霉(ANSTJO1)及黑曲霉标准组(2485)相比对雏鸡增重影响 | 第33-34页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态的制备 | 第34页 |
| 2.2.8 菌株克隆及筛选 | 第34-37页 |
| 2.2.9 异源蛋白外分泌表达质粒构建 | 第37-38页 |
| 2.2.10 GFP表达质粒的构建 | 第38页 |
| 2.2.11 黑曲霉原生质体的制备及转染 | 第38-40页 |
| 2.2.12 EtMIC2稳定表达载体构建 | 第40页 |
| 2.2.13 表达GFP与MIC2蛋白结果检测 | 第40-42页 |
| 2.2.14 黑曲霉表面展示系统的构建 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-65页 |
| 3.1 黑曲霉ANSTJ01菌株生物安全性评价 | 第43-47页 |
| 3.1.1 黑曲霉添加剂对海兰褐雏鸡的生长速度的影响 | 第43页 |
| 3.1.2 血常规检测 | 第43-45页 |
| 3.1.3 相关脏器的组织切片观察 | 第45-47页 |
| 3.2 ANSTJ01菌株与2485菌株对雏鸡生长速度及免疫器官的影响 | 第47-50页 |
| 3.2.1 ANSTJ01菌株与2485菌株对雏鸡生长速度比较 | 第47-48页 |
| 3.2.2 ANSTJ01菌株与2485菌株对雏鸡免疫器官的比较 | 第48-50页 |
| 3.3 黑曲霉原生质体转化体系的建立 | 第50-52页 |
| 3.3.1 黑曲霉ANSTJ01菌株抗性标记筛选 | 第50-51页 |
| 3.3.2 黑曲霉ANTS原生质体制备 | 第51-52页 |
| 3.4 ANSTJ01外分泌系统的构建 | 第52-62页 |
| 3.4.1 基础质粒构建 | 第52-54页 |
| 3.4.2 GPP质粒鉴定 | 第54-55页 |
| 3.4.3 GFP外分泌表达 | 第55-58页 |
| 3.4.4 pPshD-GFP-EtMIC2的构建及表达 | 第58-61页 |
| 3.4.5 优化阳性菌株C源培养基 | 第61-62页 |
| 3.5 ANSTJ01表面展示系统 | 第62-65页 |
| 3.5.1 pPshD-CBM-GFP表面展示 | 第62-63页 |
| 3.5.2 ANSTJ01-MIC2表面展示菌株 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-70页 |
| 4.1 黑曲霉ANSTJ01菌株对海兰褐雏鸡安全性评价 | 第65-66页 |
| 4.2 黑曲霉外分泌系统 | 第66-68页 |
| 4.3 黑曲霉表面展示系统 | 第68-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
