| 中文摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 布鲁氏菌病与布鲁氏菌概况 | 第12页 |
| 1.2 布鲁氏菌基因组概述 | 第12-14页 |
| 1.3 DNA测序技术简述 | 第14-15页 |
| 1.3.1 一代测序技术 | 第14页 |
| 1.3.2 二代测序技术 | 第14-15页 |
| 1.3.3 三代测序技术 | 第15页 |
| 1.4 布鲁氏菌疫苗的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4.1 牛种布鲁氏菌S19(A19)疫苗 | 第15-16页 |
| 1.4.2 粗糙型布鲁氏菌RB51疫苗 | 第16页 |
| 1.4.3 羊种布鲁氏菌Rev1疫苗 | 第16-17页 |
| 1.4.4 猪种布鲁氏菌S2疫苗 | 第17页 |
| 1.4.5 新型疫苗 | 第17页 |
| 1.5 单克隆抗体制备技术发展 | 第17-19页 |
| 1.5.1 鼠源性单克隆抗体 | 第17-18页 |
| 1.5.2 噬菌体抗体库单抗制备技术 | 第18-19页 |
| 1.5.3 转基因小鼠制备人免疫球蛋白 | 第19页 |
| 1.5.4 嵌合抗体技术 | 第19页 |
| 1.6 布鲁氏菌诊断技术的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.6.1 病原鉴定 | 第19-21页 |
| 1.6.2 血清学诊断 | 第21-23页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 实验所用菌株 | 第23-24页 |
| 2.1.2 所用试剂和耗材 | 第24页 |
| 2.1.3 实验用主要仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.2 犬种布鲁氏菌GB1株全基因组测序与分析 | 第26-30页 |
| 2.2.1 犬布鲁氏菌GB1株全基因组测序 | 第26-30页 |
| 2.2.2 犬布鲁氏菌GB1株生物信息学分析 | 第30页 |
| 2.3 抗粗糙型布鲁氏菌单抗杂交瘤细胞株的制备 | 第30-35页 |
| 2.3.1 免疫抗原及单抗筛选抗原的制备 | 第30页 |
| 2.3.2 小鼠免疫 | 第30-31页 |
| 2.3.3 融合老鼠选定 | 第31页 |
| 2.3.4 间接ELISA筛选方法的建立 | 第31页 |
| 2.3.5 SP2/0细胞复苏和培养 | 第31页 |
| 2.3.6 饲养细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.7 细胞融合 | 第32页 |
| 2.3.8 间接ELISA法筛选阳性孔 | 第32-33页 |
| 2.3.9 阳性杂交瘤细胞的克隆 | 第33页 |
| 2.3.10 细胞保存及腹水制备 | 第33页 |
| 2.3.11 单克隆抗体的纯化与鉴定 | 第33-35页 |
| 2.4 犬种布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测方法的初步建立 | 第35-37页 |
| 2.4.1 单抗及样本来源 | 第35页 |
| 2.4.2 制备包被抗原 | 第35页 |
| 2.4.3 c-ELISA的操作步骤 | 第35页 |
| 2.4.4 最佳抗原包被浓度和单抗工作浓度的确定 | 第35-36页 |
| 2.4.5 单抗及酶标抗体工作条件的优化 | 第36页 |
| 2.4.6 包被液及包被条件的确定 | 第36页 |
| 2.4.7 封闭液与封闭条件的确定 | 第36页 |
| 2.4.8 单抗作用条件的选择 | 第36页 |
| 2.4.9 底物溶液作用条件的选择 | 第36页 |
| 2.4.10 阴阳性临界值的确定 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-53页 |
| 3.1 犬种布鲁氏菌GB1株的全基因组测序与分析 | 第37-47页 |
| 3.1.1 犬种布鲁氏菌GB1的全基因组测序结果 | 第37-39页 |
| 3.1.2 犬布鲁氏菌GB1株生物信息学分析结果 | 第39-41页 |
| 3.1.3 布鲁氏菌GB1株基因功能分析 | 第41-42页 |
| 3.1.4 布鲁氏菌GB1株与布鲁氏菌RM6/66株基因组序列变异分析 | 第42-47页 |
| 3.2 犬种布鲁氏菌单抗制备结果 | 第47-49页 |
| 3.2.1 间接ELISA筛选方法的建立结果 | 第47页 |
| 3.2.2 融合小鼠的选择 | 第47页 |
| 3.2.3 细胞融合、阳性杂交瘤细胞株的筛选结果 | 第47-48页 |
| 3.2.4 单抗免疫学特性鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3 犬种布鲁氏菌竞争ELISA抗体检测方法的初步建立 | 第49-53页 |
| 3.3.1 最佳抗原包被浓度和单抗工作浓度的确定 | 第49页 |
| 3.3.2 单抗及酶标抗体工作条件的优化 | 第49-50页 |
| 3.3.3 包被液及包被条件的确定 | 第50页 |
| 3.3.4 封闭液与封闭条件的确定 | 第50-51页 |
| 3.3.5 单抗作用条件的选择 | 第51页 |
| 3.3.6 底物溶液作用条件的最佳选择 | 第51-52页 |
| 3.3.7 阴阳性临界值的确定 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 6 参考文献 | 第59-67页 |
| 7 致谢 | 第67-69页 |
| 8 攻读学位期间发表论文情况 | 第69页 |
