| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第14-29页 |
| 1.1 辅酶 Q 的结构与分布 | 第14页 |
| 1.2 辅酶 Q 生物合成 | 第14-18页 |
| 1.2.1 辅酶 Q 侧链前体异戊二烯焦磷酸的合成 | 第14-15页 |
| 1.2.2 辅酶 Q 侧链的合成 | 第15-17页 |
| 1.2.3 辅酶 Q 的合成 | 第17-18页 |
| 1.3 辅酶 Q 的生理功能 | 第18-20页 |
| 1.3.1 参与电子传递 | 第18-19页 |
| 1.3.2 细胞抗氧化功能 | 第19页 |
| 1.3.3 阻止细胞凋亡 | 第19页 |
| 1.3.4 辅助线粒体膜质子梯度解偶联 | 第19页 |
| 1.3.5 增强免疫系统的消炎功能 | 第19-20页 |
| 1.3.6 参与蛋白二硫键的形成 | 第20页 |
| 1.4 辅酶 Q 的应用 | 第20-21页 |
| 1.4.1 辅酶 Q_(10)在食品与化妆品领域的应用 | 第20页 |
| 1.4.2 辅酶 Q_(10)在心脑血管疾病治疗方面的应用 | 第20-21页 |
| 1.4.3 辅酶 Q_(10)在神经系统相关疾病方面的应用 | 第21页 |
| 1.4.4 辅酶 Q_(10)在治疗糖尿病方面的应用 | 第21页 |
| 1.4.5 辅酶 Q_(10)在辅助治疗肿瘤方面的应用 | 第21页 |
| 1.4.6 辅酶 Q_(10)的其它应用 | 第21页 |
| 1.5 辅酶 Q_(10)的来源 | 第21-24页 |
| 1.5.1 化学合成法生产辅酶 Q_(10) | 第21-22页 |
| 1.5.2 提取法生产辅酶 Q_(10) | 第22-23页 |
| 1.5.3 生物法生产辅酶 Q_(10) | 第23-24页 |
| 1.6 生 CoQ_(10)的微生物菌种构建方法 | 第24-26页 |
| 1.6.1 诱变 | 第24页 |
| 1.6.2 改变辅酶 Q_(10)合成途径 | 第24-25页 |
| 1.6.3 增加 CoQ_(10)合成过程中关键酶的表达量 | 第25页 |
| 1.6.4 阻断竞争性分支途径 | 第25-26页 |
| 1.7 研究思路与计划 | 第26-29页 |
| 1.7.1 目前存在的问题 | 第26-27页 |
| 1.7.2 研究思路与计划 | 第27-29页 |
| 第二章 辅酶 Q_(10)合成关键酶基因克隆 | 第29-50页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第29-36页 |
| 2.2.1 菌种与培养基 | 第29-30页 |
| 2.2.2 实验载体与引物 | 第30-31页 |
| 2.2.3 试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第32-34页 |
| 2.2.5 各酶序列的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 2.2.6 R.rddsA 对大肠杆菌 ispB 的取代 | 第35页 |
| 2.2.7 各酶对辅酶Q合成的影响研究 | 第35-36页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第36-48页 |
| 2.3.1 基因克隆与鉴定 | 第36-44页 |
| 2.3.2 R.rddsA 大肠杆菌 ispB 的取代 | 第44-46页 |
| 2.3.3 各关键酶对辅酶 Q 合成的影响 | 第46-48页 |
| 2.4 本章小结 | 第48-50页 |
| 第三章 R.radiobacterDPS 的热稳定性研究 | 第50-70页 |
| 3.1 引言 | 第50页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第50-55页 |
| 3.2.1 菌种与培养基 | 第50-51页 |
| 3.2.2 实验载体与引物 | 第51-52页 |
| 3.2.3 试剂 | 第52-53页 |
| 3.2.4 大肠杆菌中放射型根瘤菌 ddsA 产辅酶 Q 特性研究 | 第53页 |
| 3.2.5 聚十异戊二烯合成酶同源建模与结构稳定性分析 | 第53页 |
| 3.2.6 ddsA 基因点突变及其催化性能改变 | 第53-54页 |
| 3.2.7 DPS 突变体催化性能鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第55-69页 |
| 3.3.1 大肠杆菌中放射型根瘤菌 ddsA 的催化特性 | 第55-57页 |
| 3.3.2 放射型根瘤菌 DPS 的热稳定性改造 | 第57-65页 |
| 3.3.3 突变前后结构对比 | 第65-69页 |
| 3.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 第四章 高产辅酶 Q_(10)菌种构建 | 第70-96页 |
| 4.1 引言 | 第70页 |
| 4.2 材料与方法 | 第70-83页 |
| 4.2.1 菌种与培养基 | 第70-71页 |
| 4.2.2 实验载体与引物 | 第71-74页 |
| 4.2.3 试剂与酶 | 第74页 |
| 4.2.4 实验方法 | 第74-83页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第83-94页 |
| 4.3.1 ddsA 对 E.coliDE3Q10 nirB 的取代 | 第83-85页 |
| 4.3.2 ubiA 和 idi 对 E.coli DE3 Q101 nirD 的取代 | 第85-88页 |
| 4.3.3 ispA 对 E.coliDE3Q102 nirC 的取代 | 第88-91页 |
| 4.3.4 R.rdxs 对 E.coli DE3103 narG 的取代 | 第91-92页 |
| 4.3.5 各取代基因的鉴定 | 第92-93页 |
| 4.3.6 各构建菌种合成辅酶 Q_(10)能力的比较 | 第93-94页 |
| 4.4 本章小结 | 第94-96页 |
| 第五章 辅酶 Q_(10)发酵工艺研究 | 第96-107页 |
| 5.1 引言 | 第96页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第96-97页 |
| 5.2.1 实验菌种 | 第96-97页 |
| 5.2.2 实验试剂与材料 | 第97页 |
| 5.3 实验方法 | 第97-98页 |
| 5.3.1 大肠杆菌干重的测定曲线 | 第97页 |
| 5.3.2 厌氧段最佳诱导时长的探索 | 第97页 |
| 5.3.3 好氧合成最佳时长的探索 | 第97-98页 |
| 5.3.4 最佳诱导次数的探索 | 第98页 |
| 5.3.5 最佳硝酸盐浓度的探索 | 第98页 |
| 5.3.6 最佳 pH 值的确定 | 第98页 |
| 5.3.7 最佳温度的确定 | 第98页 |
| 5.3.8 最佳工艺条件验证 | 第98页 |
| 5.4 实验结果与分析 | 第98-106页 |
| 5.4.1 大肠杆菌干重与光密度 OD_(600) 的关系 | 第98-99页 |
| 5.4.2 厌氧段最佳诱导时长的探索 | 第99-100页 |
| 5.4.3 好氧合成最佳时长的探索 | 第100-102页 |
| 5.4.4 最佳诱导次数的探索 | 第102页 |
| 5.4.5 最佳硝酸盐浓度的探索 | 第102-104页 |
| 5.4.6 最佳 pH 值的确定 | 第104-105页 |
| 5.4.7 最佳温度的确定 | 第105-106页 |
| 5.4.8 最佳工艺条件验证 | 第106页 |
| 5.5 本章小结 | 第106-107页 |
| 第六章 结论与展望 | 第107-111页 |
| 6.1 结论 | 第107-109页 |
| 6.2 论文的创新点 | 第109页 |
| 6.3 展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-125页 |
| 附录一：nirB 操纵子取代后的测序结果 | 第125-138页 |
| 附录二：narG操纵子取代后的测序结果 | 第138-145页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第145-146页 |
| 致谢 | 第146-147页 |
| 附件 | 第147页 |
