| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 第一章 综述 | 第9-16页 |
| 1 小麦赤霉病和禾谷镰刀菌 | 第9-10页 |
| 1.1 小麦赤霉病 | 第9页 |
| 1.2 禾谷镰刀菌的形态学及其侵染循环 | 第9-10页 |
| 2 Rho族蛋白及其Rho蛋白的功能多样性 | 第10-14页 |
| 2.1 Rho族蛋白的结构 | 第10-11页 |
| 2.2 Rho蛋白的生物学功能 | 第11-14页 |
| 2.2.1 哺乳动物中Rho蛋白的功能研究 | 第11-12页 |
| 2.2.2 植物中Rho蛋白的功能研究 | 第12-13页 |
| 2.2.3 真菌中Rho蛋白的功能研究 | 第13-14页 |
| 3 禾谷镰刀苗Rho4同源蛋白功能研究的意义 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-28页 |
| 1 实验材料 | 第16-17页 |
| 1.1 供试菌株 | 第16页 |
| 1.2 常用培养基及配方 | 第16-17页 |
| 1.3 抗生素 | 第17页 |
| 1.4 生化试剂 | 第17页 |
| 2 实验方法 | 第17-28页 |
| 2.1 禾谷镰刀菌Rho4同源蛋白的生物信息学分析 | 第17-18页 |
| 2.1.1 禾谷镰刀菌Rho4同源蛋白序列的获得 | 第17-18页 |
| 2.1.2 八种真菌中Rho4蛋白序列的同源性比对 | 第18页 |
| 2.1.3 八种真菌中Rho4同源蛋白的系统进化关系分析 | 第18页 |
| 2.2 禾谷镰刀茵目的基因敲除载体的构建方法 | 第18-21页 |
| 2.2.1 引物设计与PCR扩增 | 第18-19页 |
| 2.2.2 DNA片段的回收 | 第19页 |
| 2.2.3 PCR产物的TA克隆 | 第19-21页 |
| 2.2.4 质粒的提取 | 第21页 |
| 2.2.5 质粒的酶切与连接 | 第21页 |
| 2.3 禾谷镰刀菌cDNA的制备 | 第21-23页 |
| 2.3.1 禾谷镰刀苗RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.3.2 逆转录RT-PCR | 第22-23页 |
| 2.4 禾谷镰刀菌基因的敲除与互补 | 第23-26页 |
| 2.4.1 禾谷镰刀菌目的基因的敲除 | 第23-25页 |
| 2.4.1.1 禾谷镰刀菌基因敲除原理 | 第23-24页 |
| 2.4.1.2 禾谷镰刀菌目的基因敲除载体的构建 | 第24-25页 |
| 2.4.2 禾谷镰刀菌互补载体构建 | 第25页 |
| 2.4.3 FgRho4-GFP融合互补载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.4.4 禾谷镰刀菌原生质体的制备和转化 | 第26页 |
| 2.4.5 转化子的鉴定 | 第26页 |
| 2.4.5.1 PCR扩增验证 | 第26页 |
| 2.4.5.2 Southern Blot | 第26页 |
| 2.5 禾谷镰刀菌的表型分析 | 第26-28页 |
| 2.5.1 禾谷镰刀菌菌落生长速率测定 | 第26页 |
| 2.5.2 禾谷镰刀菌产孢量统计 | 第26-27页 |
| 2.5.3 禾谷镰刀菌孢子及菌丝形态观察 | 第27页 |
| 2.5.4 禾谷镰刀菌孢子萌发观察 | 第27页 |
| 2.5.5 禾谷镰刀菌有性交配的鉴定 | 第27页 |
| 2.5.6 小麦麦穗活体注射接种鉴定禾谷镰刀菌的致病性 | 第27-28页 |
| 第三章 结果与分析 | 第28-40页 |
| 1 生物信息学结果及分析 | 第28页 |
| 1.1 禾谷镰刀菌Rho4同源蛋白序列的获得 | 第28页 |
| 1.2 八种真菌中Rho4蛋白序列的同源性比对分析 | 第28页 |
| 1.3 八种真菌中Rho4 GTPase同源蛋白的系统进化关系 | 第28页 |
| 2 禾谷镰刀菌Rho4同源蛋白的功能分析 | 第28-37页 |
| 2.1 禾谷镰刀菌Rho4同源蛋白KO突变体和互补菌株的筛选与鉴定 | 第28-31页 |
| 2.1.1 PCR扩增初筛 | 第30页 |
| 2.1.2 RT-PCR(反转录PCR)验证 | 第30页 |
| 2.1.3 Southern blot验证 | 第30-31页 |
| 2.2 禾谷镰刀菌Rho4同源蛋白KO突变体的表型分析 | 第31-35页 |
| 2.2.1 禾谷镰刀菌Rho4同源蛋白KO突变体对菌丝生长的影响 | 第31-32页 |
| 2.2.2 禾谷镰刀菌Rho4同源蛋白KO突变体对分生孢子的影响 | 第32页 |
| 2.2.3 禾谷镰刀菌Rho4同源蛋白KO突变体影响隔膜的形成 | 第32-33页 |
| 2.2.4 禾谷镰刀菌Rho4同源蛋白KO突变体对有性生殖的影响 | 第33-34页 |
| 2.2.5 禾谷镰刀菌Rho4同源蛋白KO突变体对致病性的影响 | 第34-35页 |
| 2.3 禾谷镰刀菌Rho4互补菌株的筛选及表型分析 | 第35-36页 |
| 2.3.1 禾谷镰刀菌Rho4互补菌株的筛选 | 第35页 |
| 2.3.2 禾谷镰刀菌Rho4互补菌株的表型分析 | 第35-36页 |
| 2.4 禾谷镰刀菌Rho4蛋白在菌丝细胞中的定位观察 | 第36-37页 |
| 3 禾谷镰刀菌Rho4假定GEF--FgBud3同源蛋白的鉴定与表型分析 | 第37-40页 |
| 3.1 禾谷镰刀菌Bud3同源蛋白KO突变体的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.1.1 PCR扩增初筛 | 第37页 |
| 3.1.2 Southern blot验证 | 第37-38页 |
| 3.2 禾谷镰刀菌BucB同源蛋白KO突变体的表型分析 | 第38-40页 |
| 第四章 小结 | 第40-43页 |
| 1 结论与讨论 | 第40-42页 |
| 2 后续工作 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 附录 | 第49-53页 |
| 附表 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
