| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词及中英文对照 | 第9-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-27页 |
| 1 植物磷脂酶C的研究背景 | 第13-19页 |
| 1.1 植物特异性磷脂酶C(PI-PLC) | 第13-17页 |
| 1.1.1 植物PI-PLC的结构特征及其分类 | 第14页 |
| 1.1.2 植物PI-PLC的酶活特性 | 第14-15页 |
| 1.1.3 植物PI-PLC的功能与作用机制 | 第15-17页 |
| 1.2 植物非特异性磷脂酶C(NPC) | 第17-18页 |
| 1.2.1 植物NPC的表达模式与亚细胞定位 | 第17页 |
| 1.2.2 植物NPC的细胞生物学功能 | 第17-18页 |
| 1.3 水稻OsPLCs与OsNPCs的比较 | 第18-19页 |
| 2 RNA干扰技术 | 第19-21页 |
| 2.1 RNAi引起基因沉默的分子机制 | 第20页 |
| 2.2 amiRNA技术的应用与前景 | 第20-21页 |
| 3 根癌农杆菌Ti质粒介导基因转化 | 第21-23页 |
| 3.1 根癌农杆菌侵染、转化的作用机制 | 第22页 |
| 3.2 提高根癌农杆菌转化效率的策略 | 第22-23页 |
| 4 CRISPR/Cas系统 | 第23-25页 |
| 5 膜脂与盐胁迫 | 第25页 |
| 6 研究目的与意义 | 第25-27页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第27-51页 |
| 1 实验材料 | 第27-33页 |
| 1.1 植物材料 | 第27页 |
| 1.2 菌株与质粒 | 第27页 |
| 1.3 引物名称和序列 | 第27-28页 |
| 1.4 所用工具酶和试剂盒 | 第28-29页 |
| 1.5 培养基 | 第29-33页 |
| 1.5.1 植物组织培养: | 第29-31页 |
| 1.5.2 农杆菌悬浮培养: | 第31-32页 |
| 1.5.3 细菌培养: | 第32页 |
| 1.5.4 水稻育苗培养: | 第32-33页 |
| 1.6 其它主要生物学试剂 | 第33页 |
| 2 试验方法 | 第33-51页 |
| 2.1 OsPLC3转基因株系的构建、鉴定以及育种 | 第33-41页 |
| 2.1.1 水稻叶片基因组DNA (genomic DNA,gDNA)的提取 | 第34页 |
| 2.1.2 水稻组织RNA的提取和反转录 | 第34-35页 |
| 2.1.3 OsPLC3超表达载体的构建 | 第35-38页 |
| 2.1.4 植物组织培养 | 第38-40页 |
| 2.1.5 转基因株系的鉴定 | 第40-41页 |
| 2.1.6 转基因株系的遗传育种 | 第41页 |
| 2.2 OsPLC3表达模式分析 | 第41-43页 |
| 2.2.1 qRT-PCR检测 | 第41页 |
| 2.2.2 GUS组织定位分析 | 第41-43页 |
| 2.3 OsPLC3亚细胞定位 | 第43-46页 |
| 2.3.1 基因枪瞬时转化 | 第43-44页 |
| 2.3.2 水稻原生质体转化 | 第44-46页 |
| 2.4 OsPLC3酶活性分析 | 第46-49页 |
| 2.4.1 融合蛋白的原核表达 | 第46-47页 |
| 2.4.2 包涵体蛋白的纯化和复性 | 第47-49页 |
| 2.4.3 OsPLC3活性测定 | 第49页 |
| 2.5 水稻表型观察与功能初步分析 | 第49-51页 |
| 2.5.1 水稻农艺性状的观察与分析 | 第49-50页 |
| 2.5.2 OsPLC3耐盐性分析 | 第50-51页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第51-74页 |
| 1 水稻PLC基因家族蛋白序列分析 | 第51-53页 |
| 2 OsPLC3在拟南芥中的表型观察 | 第53-54页 |
| 2.1 pBA-OsPLC3转基因株系的鉴定 | 第53-54页 |
| 2.2 pBA-OsPLC3转基因株系的表型观察 | 第54页 |
| 3 OsPLC3超表达与基因沉默株系的构建与鉴定 | 第54-57页 |
| 3.1 OsPLC3-OE转基因株系的鉴定与分析 | 第54-55页 |
| 3.2 OsPLC3-RNAi转基因株系的鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3 OsPLC3-CRISPR/Cas9转基因株系的构建与鉴定 | 第56-57页 |
| 4 OsPLC3的表达模式 | 第57-61页 |
| 4.1 OsPLC3在水稻不同发育时期的组织表达 | 第57-58页 |
| 4.2 OsPLC3亚细胞定位 | 第58-61页 |
| 5 OsPLC3-RNAi与OsPLC3-OE转基因水稻表型分析 | 第61-69页 |
| 5.1 OsPLC3-RNAi转基因植株表型观察 | 第62-63页 |
| 5.2 OsPLC3-OE转基因植株的表型观察 | 第63-65页 |
| 5.3 OsPLC3基因的耐盐性分析 | 第65-69页 |
| 5.3.1 盐胁迫处理对OsPLC3基因转录水平的影响 | 第65-66页 |
| 5.3.2 盐胁迫对OsPLC3-RNAi植株生长的影响 | 第66-68页 |
| 5.3.3 其它胁迫处理胁迫处理对OsPLC3基因转录水平的影响 | 第68-69页 |
| 6 OsPLC3的酶活分析 | 第69-74页 |
| 6.1 OsPLC3蛋白表达与纯化 | 第69-72页 |
| 6.2 OsPLC3酶活测定 | 第72-74页 |
| 第四章 小结与讨论 | 第74-78页 |
| 1 小结 | 第74-75页 |
| 2 讨论 | 第75-78页 |
| 2.1 OsPLC3可能的生物学功能 | 第75-76页 |
| 2.2 OsPLC3可能参与盐胁迫响应 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录 | 第84-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
