| 主要符号表 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一部分 前言 | 第14-20页 |
| 1.1 骨形态发生蛋白 | 第14-16页 |
| 1.1.1 人骨形态发生蛋白-7（hBMP-7） | 第14-15页 |
| 1.1.2 hBMP-7 在骨科领域中的应用 | 第15-16页 |
| 1.2 重组人骨形态发生蛋白-7（rhBMP-7）的表达 | 第16-18页 |
| 1.2.1 原核细胞表达rhBMP-7 | 第16页 |
| 1.2.2 真菌表达rhBMP-7 | 第16页 |
| 1.2.3 昆虫细胞表达rhBMP-7 | 第16-17页 |
| 1.2.4 哺乳动物细胞表达rhBMP-7 | 第17-18页 |
| 1.3 本项目拟解决的问题 | 第18-20页 |
| 第二部分 rhBMP-7 在U2-OS细胞中的表达 | 第20-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 细胞与质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-32页 |
| 2.2.1 真核表达质粒（pcDNA3.1-rhBMP7）的构建与鉴定 | 第22-25页 |
| 2.2.2 U2-OS细胞培养 | 第25页 |
| 2.2.3 转染及筛选 | 第25-27页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR检测rhBMP-7 基因在mRNA水平上的表达 | 第27-29页 |
| 2.2.5 Western Blot检测rhBMP-7 的表达 | 第29-32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-34页 |
| 2.3.1 真核质粒(pcDNA3.1-rhBMP7)的构建 | 第32页 |
| 2.3.2 真核表达质粒pcDNA3.1-rhBMP7的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR检测rhBMP-7 基因在mRNA水平上的表达 | 第33-34页 |
| 2.3.4 Western Blot检测rhBMP-7 的表达 | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三部分 不同信号肽对U2-OS细胞分泌表达rhBMP-7 的影响 | 第36-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-38页 |
| 3.1.1 细胞与质粒 | 第36页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第36-37页 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 | 第37-38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-43页 |
| 3.2.1 真核表达质粒 （ pcDNA3.1-rhB7-hBMP7、pcDNA3.1-rhSP-hBMP7、pcDNA3.1-rhM9-hB-MP7）的构建与鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.2 U2-OS细胞的转染及筛选 | 第39页 |
| 3.2.3 实时荧光定量PCR检测rhBMP-7 基因在mRNA水平上的表达 | 第39-40页 |
| 3.2.4 Western Blot检测rhBMP-7 的表达 | 第40-41页 |
| 3.2.5 ELISA检测rhBMP-7 的表达 | 第41-43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-47页 |
| 3.3.1 真核表达质粒的构建 | 第43页 |
| 3.3.2 真核表达质粒酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.3 实时荧光定量PCR检测rhBMP-7 基因在mRNA水平上的表达 | 第44页 |
| 3.3.4 Western Blot检测rhBMP-7 的表达 | 第44-46页 |
| 3.3.5 ELISA检测rhBMP-7 的表达 | 第46-47页 |
| 3.4 讨论 | 第47-50页 |
| 第四部分 rhBMP-7 的纯化与分析 | 第50-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第50-52页 |
| 4.1.1 细胞 | 第50-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-55页 |
| 4.2.1 rhBMP-7 的纯化 | 第52-53页 |
| 4.2.2 rhBMP-7 糖基化分析 | 第53-54页 |
| 4.2.3 检测rhBMP-7 的生物活性 | 第54-55页 |
| 4.3 实验结果 | 第55-58页 |
| 4.3.1 BCA法测定rhBMP-7 的蛋白浓度 | 第55-56页 |
| 4.3.2 SDS-PAGE电泳鉴定rhBMP-7 | 第56页 |
| 4.3.3 rhBMP-7 糖基化分析 | 第56-57页 |
| 4.3.4 检测rhBMP-7 对NIH3T3细胞ALP活性的影响 | 第57-58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-60页 |
| 结论与展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
