| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1.1 酪蛋白巨肽的研究现状及生物学作用 | 第13-17页 |
| 1.1.1 酪蛋白巨肽CMP | 第13页 |
| 1.1.2 CMP的组成和结构 | 第13-14页 |
| 1.1.3 CMP的生物学活性和营养特性 | 第14-17页 |
| 1.2 CMP的生产方法 | 第17-18页 |
| 1.2.1 天然提取法 | 第17-18页 |
| 1.2.2 基因工程方法 | 第18页 |
| 1.3 CMP前景展望 | 第18-19页 |
| 1.4 大肠杆菌表达系统简介 | 第19-25页 |
| 1.4.1 用大肠杆菌进行基因表达的一般策略 | 第19页 |
| 1.4.2 影响基因重组蛋白质在大肠杆菌中表达的因素 | 第19-21页 |
| 1.4.3 表达类型的选择和培养条件的控制 | 第21-22页 |
| 1.4.4 外源蛋白在大肠杆菌中的表达形式 | 第22-25页 |
| 1.5 重组蛋白的分离纯化 | 第25-29页 |
| 1.5.1 层析技术 | 第25-29页 |
| 第二章 酪蛋白巨肽的基因克隆 | 第29-39页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 试验材料与仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第29页 |
| 2.2.2 实验仪器和试剂 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-35页 |
| 2.3.1 引物设计及合成 | 第30-31页 |
| 2.3.2 引物磷酸化 | 第31页 |
| 2.3.3 Klenow补齐 | 第31页 |
| 2.3.4 PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.3.5 PCR产物回收(玻璃奶法) | 第32页 |
| 2.3.6 连接 | 第32-33页 |
| 2.3.7 感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.3.8 转化 | 第33页 |
| 2.3.9 挑菌 | 第33页 |
| 2.3.10 提质粒(碱裂解法) | 第33-34页 |
| 2.3.11 酶切鉴定 | 第34页 |
| 2.3.12 目的基因的序列测定 | 第34页 |
| 2.3.13 目的基因连入表达载体pET-28a(+) | 第34-35页 |
| 2.3.14 目的基因的序列测定 | 第35页 |
| 2.3.15 转化入E.coli BL21(DE3) | 第35页 |
| 2.3.16 保存甘油管 | 第35页 |
| 2.4 结果分析讨论 | 第35-37页 |
| 2.4.1 PCR产物琼脂糖凝胶电泳 | 第35-36页 |
| 2.4.2 酶切鉴定 | 第36页 |
| 2.4.3 测序鉴定 | 第36页 |
| 2.4.4 转化入E.coli BL21(DE3) | 第36-37页 |
| 2.5 本章小结 | 第37-39页 |
| 第三章 基因工程菌培养条件优化 | 第39-61页 |
| 3.1 引言 | 第39页 |
| 3.2 试验材料与仪器 | 第39-40页 |
| 3.2.1 试验材料 | 第39页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第39-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.3.1 培养方法 | 第40页 |
| 3.3.2 不同菌种选择 | 第40页 |
| 3.3.3 不同诱导温度对融合蛋白表达量的影响 | 第40-41页 |
| 3.3.4 不同诱导时间对融合蛋白表达量的影响 | 第41页 |
| 3.3.5 不同诱导剂浓度对融合蛋白表达量的影响 | 第41页 |
| 3.3.6 不同卡那霉素浓度对融合蛋白表达量的影响 | 第41页 |
| 3.3.7 不同乳糖浓度对融合蛋白表达量的影响 | 第41-42页 |
| 3.3.8 正交实验分析不同诱导条件对融合蛋白表达量的影响 | 第42页 |
| 3.3.9 正交优化结果对比验证 | 第42页 |
| 3.4 结果及讨论 | 第42-58页 |
| 3.4.1 不同菌种融合蛋白表达量分析 | 第42-44页 |
| 3.4.2 不同诱导温度对融合蛋白表达量的影响 | 第44-46页 |
| 3.4.3 不同诱导时间对融合蛋白表达量的影响 | 第46-48页 |
| 3.4.4 不同IPTG浓度对融合蛋白表达量的影响 | 第48-50页 |
| 3.4.5 Kan浓度对融合蛋白表达量的影响 | 第50-52页 |
| 3.4.6 乳糖浓度对融合蛋白表达量的影响 | 第52-54页 |
| 3.4.7 正交实验分析 | 第54-56页 |
| 3.4.8 正交优化结果对照 | 第56-58页 |
| 3.5 小结 | 第58-61页 |
| 3.5.1 宿主及载体 | 第58-59页 |
| 3.5.2 培养条件分析 | 第59-61页 |
| 第四章 CMP分离纯化与鉴定 | 第61-69页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第61-62页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第61页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第61-62页 |
| 4.3 实验方法 | 第62-64页 |
| 4.3.1 融合蛋白在细菌E.coli BL21内的分布 | 第62-63页 |
| 4.3.2 融合蛋白分离纯化 | 第63页 |
| 4.3.3 Western-Blot鉴定融合蛋白 | 第63-64页 |
| 4.3.4 MALDI-TOF-MS鉴定hCMP | 第64页 |
| 4.4 结果及分析 | 第64-68页 |
| 4.4.1 融合蛋白在菌体中的分布 | 第64-66页 |
| 4.4.2 融合蛋白分离纯化 | 第66-67页 |
| 4.4.3 Western-Blot鉴定融合蛋白 | 第67页 |
| 4.4.4 MALDI-TOF-MS鉴定hCMP | 第67-68页 |
| 4.5 小结 | 第68-69页 |
| 第五章 结论与建议 | 第69-71页 |
| 5.1 结论 | 第69页 |
| 5.2 建议 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 附录 | 第75-79页 |
| 附录一 各种试剂的配制 | 第75-78页 |
| 附录二 培养基 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第80-81页 |
| 作者和导师简介 | 第81-82页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第82-83页 |
