| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 常用中英文缩写词 | 第11-12页 |
| 文献综述 | 第12-21页 |
| 1 MHC研究概况 | 第12-17页 |
| 1.1 MHC分子的起源 | 第12页 |
| 1.2 B-F/B-L分子结构 | 第12-16页 |
| 1.2.1 B-F分子的结构 | 第13-14页 |
| 1.2.2 B-L分子的结构 | 第14-15页 |
| 1.2.3 MHC分子和抗原肽的作用特性 | 第15-16页 |
| 1.3 MHC分子的分布 | 第16-17页 |
| 1.3.1 MHC I类分子的分布 | 第16页 |
| 1.3.2 MHC II类分子的分布 | 第16-17页 |
| 2 MHC II分子的生物学功能 | 第17-21页 |
| 2.1 MHC II类分子的主要功能 | 第17-18页 |
| 2.2 Ii链的生物学功能 | 第18-21页 |
| 2.2.1 Ii链对MHC II分子呈递抗原过程中的协助作用 | 第18-20页 |
| 2.2.2 Ii链促进B细胞的分化、成熟 | 第20页 |
| 2.2.3 Ii链与MHC II分子相互作用的研究现状 | 第20-21页 |
| 引言 | 第21-22页 |
| 1 材料与方法 | 第22-40页 |
| 1.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第22页 |
| 1.1.2 质粒和菌株 | 第22页 |
| 1.1.3 酶类及相关试剂 | 第22页 |
| 1.1.4 主要试剂配制 | 第22-25页 |
| 1.1.4.1 培养细菌所用溶液 | 第22-23页 |
| 1.1.4.2 琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第23页 |
| 1.1.4.3 制备感受态细胞试剂 | 第23页 |
| 1.1.4.4 SDS-PAGE电泳所用试剂 | 第23-24页 |
| 1.1.4.5 Weston-Bloting实验相关试剂 | 第24-25页 |
| 1.1.4.6 融合蛋白提取与纯化所需溶液 | 第25页 |
| 1.1.4.7 细胞培养所需试剂 | 第25页 |
| 1.1.5 主要仪器 | 第25-26页 |
| 1.2 鸡Ii、B-LA和B-LB基因的原核表达 | 第26-37页 |
| 1.2.1 鸡Ii、B-LA和B-LB基因片段的克隆 | 第26-29页 |
| 1.2.1.1 鸡Ii、B-LA和B-LB基因片段的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 1.2.1.2 鸡Ii、B-LA和B-LB基因片段PCR产物的回收与纯化 | 第28-29页 |
| 1.2.2 鸡Ii、B-LA和B-LB基因重组质粒的构建 | 第29-34页 |
| 1.2.2.1 p EGFP-C1、p EGFP-N1、p GEX-4T-1、p ET-28 质粒的抽提 | 第29页 |
| 1.2.2.2 鸡Ii、B-LA和B-LB基因重组片段的双酶切 | 第29-30页 |
| 1.2.2.3 双酶切产物的回收与纯化 | 第30页 |
| 1.2.2.4 鸡Ii和B-L基因片段分别与载体p EGFP-C1、p EGFP-N1、p GEX-4T-1、p ET-28a的连接 | 第30-32页 |
| 1.2.2.5 大肠杆菌Rosetta（DE3）感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 1.2.2.6 重组质粒p GEX-4T1C-Ii、p EGFP-C1-Ii、p ET-28a-B-LA、p EGFP-N1-B-LA和p ET-28a-B-LB、p EGFP-N1-B-LB的转化 | 第32页 |
| 1.2.2.7 阳性菌的筛选与鉴定 | 第32-33页 |
| 1.2.2.8 重组质粒的抽提 | 第33页 |
| 1.2.2.9 重组质粒的双酶切鉴定 | 第33-34页 |
| 1.2.3 连接载体p GEX-4T-1 和p ET-28a的基因的原核表达 | 第34页 |
| 1.2.4 含有GST和His标签的融合蛋白的提取与纯化 | 第34-37页 |
| 1.2.4.1 含有GST和His标签的融合蛋白表达条件优化 | 第34-35页 |
| 1.2.4.2 含有GST和His标签的融合蛋白表达形式的鉴定 | 第35页 |
| 1.2.4.3 融合蛋白GST-Ii、His/B-LA和His/B-LB的大量提取与纯化 | 第35-37页 |
| 1.3 多克隆抗体的制备与抗体效价测定 | 第37-40页 |
| 1.3.1 动物免疫 | 第37页 |
| 1.3.2 多克隆抗体的制备 | 第37页 |
| 1.3.3 细胞培养、转染后荧光显微镜观察与免疫印迹实验 | 第37-38页 |
| 1.3.4 鸡Ii基因与B-L基因在原核细胞的共表达、（SDS-）PAGE及WesternBloting验证其产物的结合 | 第38-40页 |
| 1.3.4.1 鸡Ii基因与B-L基因在原核细胞的共表达 | 第38页 |
| 1.3.4.2（SDS-）PAGE及免疫印迹验证其产物的结合 | 第38-40页 |
| 2 结果与分析 | 第40-51页 |
| 2.1 鸡Ii、B-L基因的克隆及重组表达质粒的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| 2.1.1 鸡Ii、B-LA和B-LB基因的克隆及原核重组表达质粒的鉴定 | 第40页 |
| 2.1.2 鸡Ii、B-LA、B-LB重组质粒测序鉴定 | 第40-41页 |
| 2.2 连接载体p GEX-4T-1 和p ET-28a的基因的原核表达 | 第41页 |
| 2.3 含有GST和His标签的融合蛋白提取与纯化鉴定 | 第41-45页 |
| 2.3.1 含有GST和His标签的融合蛋白表达条件的优化 | 第41-44页 |
| 2.3.2 含有GST和His标签融合蛋白表达形式的鉴定 | 第44页 |
| 2.3.3 融合蛋白纯化效果鉴定与浓度测定 | 第44-45页 |
| 2.4 抗原肽免疫学特性分析 | 第45-47页 |
| 2.4.1 鸡Ii、B-LA和B-LB基因在真核细胞中定位 | 第45-46页 |
| 2.4.2 各基因重组质粒原核表达分子的免疫学特征 | 第46-47页 |
| 2.5 鸡Ii基因与B-L基因在原核细胞的共表达及检测 | 第47-51页 |
| 2.5.1 鸡Ii和B-LA、B-LB基因共转化的鉴定 | 第47-48页 |
| 2.5.2 Pull-down挂柱法纯化和检测蛋白分子间相互作用 | 第48-50页 |
| 2.5.3 免疫印迹实验验证B-LA和B-LB分子 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-53页 |
| 3.1 选择不同抗性及标签的原核表达载体p ET-28a和p GEX-4T-1 的重要性 | 第51页 |
| 3.2 应用GST-Pull-down法能够获得His/B-LA和His/B-LB复合物 | 第51页 |
| 3.3 复性后的Ii、B-LA和B-LB具有天然蛋白分子的结构 | 第51-52页 |
| 3.4 原核表达的鸡Ii、B-LA和B-LB分子可以应用于研究它们的互相结合 | 第52-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
