| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第13-20页 |
| 1 Rho家族蛋白研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1 Rho蛋白结构 | 第13-14页 |
| 1.2 Rho蛋白生物学功能 | 第14-17页 |
| 1.2.1 Rho蛋白在哺乳动物中的功能研究 | 第14-15页 |
| 1.2.2 Rho蛋白在植物中的功能研究 | 第15-16页 |
| 1.2.3 Rho蛋白在真菌中的功能研究 | 第16-17页 |
| 2 稻瘟病和稻瘟病菌 | 第17-18页 |
| 2.1 稻瘟病 | 第17-18页 |
| 2.2 稻瘟病菌及其侵染循环过程 | 第18页 |
| 3 稻瘟病菌Rho3互作蛋白筛选的研究意义 | 第18-20页 |
| 第二章 MoRho3互作蛋白的筛选 | 第20-42页 |
| 1 材料与方法 | 第20-30页 |
| 1.1 材料 | 第20-21页 |
| 1.1.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 1.1.2 培养基 | 第20-21页 |
| 1.1.3 试剂 | 第21页 |
| 1.2 实验方法 | 第21-30页 |
| 1.2.1 稻瘟病菌cDNA的制备 | 第21-23页 |
| 1.2.1.1 稻瘟病菌RNA的提取 | 第21-22页 |
| 1.2.1.2 逆转录RT-PCR | 第22-23页 |
| 1.2.2 MoRho3-BD诱饵载体的构建 | 第23页 |
| 1.2.3 酵母感受态的制备 | 第23-24页 |
| 1.2.4 酵母质粒的提取 | 第24-25页 |
| 1.2.5 酵母质粒的小量转化 | 第25页 |
| 1.2.6 MoRho3-BD重组诱饵质粒自激活实验 | 第25页 |
| 1.2.7 MoRho3-BD重组诱饵质粒对Y187细胞毒性检测 | 第25-26页 |
| 1.2.8 酵母交配 | 第26-27页 |
| 1.2.9 含互作蛋白酵母双倍体的筛选 | 第27-28页 |
| 1.2.10 互作阳性克隆子的验证及测序 | 第28-30页 |
| 1.2.10.1 互作克隆子的重复验证 | 第28页 |
| 1.2.10.2 互作克隆子cDNA片段的检验 | 第28页 |
| 1.2.10.3 互作克隆子回复杂交验证 | 第28-30页 |
| 1.2.10.3.1 大肠杆菌DH5α超级感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 1.2.10.3.2 酵母质粒转化大肠杆菌DH5α | 第29页 |
| 1.2.10.3.3 互作克隆子cDNA片段的重复验证 | 第29页 |
| 1.2.10.3.4 阳性克隆子cDNA片段的测序 | 第29页 |
| 1.2.10.3.5 互作克隆子的回复杂交验证 | 第29-30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-42页 |
| 2.1 所提取RNA的质量检测 | 第30页 |
| 2.2 酵母双杂交筛选cDNA文库 | 第30-37页 |
| 2.2.1 重组质粒pBD-MoRho3-CA的细胞毒性和自激活活性检测 | 第30-32页 |
| 2.2.2 酵母交配 | 第32-34页 |
| 2.2.3 阳性克隆子的筛选 | 第34-35页 |
| 2.2.4 阳性克隆子的测序及分析 | 第35-36页 |
| 2.2.5 MoRho3互作克隆子回复杂交验证 | 第36-37页 |
| 2.3 生物信息学法筛选MoRho3互作蛋白 | 第37-39页 |
| 2.3.1 pGADT7-X载体的构建 | 第38页 |
| 2.3.2 酵母双杂交验证MoRho3-BD和pGADT7-X的互作关系 | 第38-39页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第39-42页 |
| 第三章 MoRho3互作蛋白的功能分析 | 第42-60页 |
| 1 材料与方法 | 第42-50页 |
| 1.1 实验菌株、质粒、试剂和培养基等材料 | 第42-43页 |
| 1.1.1 实验菌株 | 第42页 |
| 1.1.2 实验质粒 | 第42-43页 |
| 1.1.3 植物材料 | 第43页 |
| 1.1.4 培养基 | 第43页 |
| 1.1.5 实验试剂 | 第43页 |
| 1.2 实验方法 | 第43-50页 |
| 1.2.1 稻瘟病菌基因组DNA的提取 | 第43-44页 |
| 1.2.2 DNA凝胶电泳 | 第44页 |
| 1.2.3 PCR扩增目的片断 | 第44-45页 |
| 1.2.4 PCR产物的克隆 | 第45页 |
| 1.2.5 细菌感受态细胞的制备 | 第45页 |
| 1.2.6 感受态细胞的转化 | 第45-46页 |
| 1.2.7 质粒DNA的提取 | 第46页 |
| 1.2.8 质粒酶切与连接 | 第46-47页 |
| 1.2.9 敲除载体的构建 | 第47页 |
| 1.2.10 稻瘟病菌原生质体的制备 | 第47-48页 |
| 1.2.11 稻瘟病菌原生质体转化 | 第48页 |
| 1.2.12 敲除突变体的鉴定 | 第48-49页 |
| 1.2.13 稻瘟病菌敲除突变体的表型分析 | 第49-50页 |
| 1.2.13.1 稻瘟病菌的生长速度测定 | 第49页 |
| 1.2.13.2 产孢量测定 | 第49页 |
| 1.2.13.3 孢子萌发及附着胞形成实验 | 第49页 |
| 1.2.13.4 洋葱表皮侵染实验 | 第49页 |
| 1.2.13.5 致病性鉴定 | 第49-50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-58页 |
| 2.1 目的基因敲除突变体的获得与鉴定 | 第50-58页 |
| 2.1.1 敲除载体的构建 | 第50页 |
| 2.1.2 敲除突变体的筛选与验证 | 第50-51页 |
| 2.1.3 敲除突变体的表型分析 | 第51-58页 |
| 2.1.3.1 生长速度测定及菌丝体形态观察 | 第51-53页 |
| 2.1.3.2 产孢量测定及孢子形态观察 | 第53-55页 |
| 2.1.3.3 孢子萌发率、附着胞形成率及洋葱表皮侵入分析 | 第55-57页 |
| 2.1.3.4 致病性分析 | 第57-58页 |
| 3 讨论与小结 | 第58-60页 |
| 第四章 结论与展望 | 第60-63页 |
| 1 通过酵母双杂交成功鉴定出10个MoRho3的互作蛋白 | 第60页 |
| 2 互作蛋白的功能分析 | 第60-61页 |
| 3 下一步实验计划 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 附录 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
