| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 研究背景介绍 | 第13-43页 |
| 1.1 脊椎动物骨骼发育简介 | 第13-21页 |
| 1.1.1 脊椎动物骨骼发育简介 | 第13-15页 |
| 1.1.2 软骨内骨化过程简介 | 第15-17页 |
| 1.1.3 生长板软骨的结构和细胞类型 | 第17-19页 |
| 1.1.4 骨重建与骨稳态维持 | 第19-21页 |
| 1.2 Wnt 信号通路简介 | 第21-26页 |
| 1.2.1 经典Wnt信号通路 | 第22-23页 |
| 1.2.2 非经典Wnt信号通路 | 第23-26页 |
| 1.3 Wnt信号通路对软骨发育的调控 | 第26-34页 |
| 1.3.1 Wnt信号通路对软骨分化的调控 | 第26-29页 |
| 1.3.2 Wnt/PCP信号通路与软骨极性 | 第29-34页 |
| 1.4 Wnt信号通路在成骨发育和骨量调控中的作用 | 第34-35页 |
| 1.5 Wls基因简介 | 第35-38页 |
| 1.5.1 Wls基因的表达谱 | 第35页 |
| 1.5.2 Wls基因的功能 | 第35-38页 |
| 1.6 Sost基因简介 | 第38-43页 |
| 1.6.1 Sost的发现与功能 | 第38-40页 |
| 1.6.2 Sost与Wnt信号通路 | 第40-41页 |
| 1.6.3 Sost的结构 | 第41-43页 |
| 第二章 实验方法和材料 | 第43-75页 |
| 2.1 分子生物学实验方法 | 第43-49页 |
| 2.1.1 质粒提取方法 | 第43-44页 |
| 2.1.2 感受态制备与转化 | 第44-45页 |
| 2.1.3 限制性内切酶反应与连接反应 | 第45页 |
| 2.1.4 Western blot实验 | 第45-47页 |
| 2.1.5 RNA抽提和反转录 | 第47-48页 |
| 2.1.6 定量PCR | 第48-49页 |
| 2.2 细胞生物学实验方法 | 第49页 |
| 2.2.1 细胞转染实验 | 第49页 |
| 2.2.2 荧光素酶定量实验 | 第49页 |
| 2.3 小鼠相关实验方法 | 第49-69页 |
| 2.3.1 实验动物和设施 | 第49-50页 |
| 2.3.2 小鼠和小鼠胚胎的基因分型 | 第50-52页 |
| 2.3.3 小鼠组织的石蜡包埋 | 第52-53页 |
| 2.3.4 小鼠组织的冰冻包埋 | 第53页 |
| 2.3.5 切片原位杂交 | 第53-57页 |
| 2.3.6 Safranin O 染色 | 第57-58页 |
| 2.3.7 Von Kossa 染色 | 第58-59页 |
| 2.3.8 H&E染色 | 第59-60页 |
| 2.3.9 TRAP染色 | 第60-61页 |
| 2.3.10 冰冻切片免疫组化 | 第61-62页 |
| 2.3.11 石蜡切片免疫组化 | 第62-64页 |
| 2.3.12 X-gal染色 | 第64-65页 |
| 2.3.13 小鼠骨架染色 | 第65-66页 |
| 2.3.14 TUNEL染色 | 第66-67页 |
| 2.3.15 BrdU标记和染色 | 第67-68页 |
| 2.3.16 软骨细胞分裂方向的计算 | 第68-69页 |
| 2.4 昆虫杆状病毒系统表达蛋白 | 第69-73页 |
| 2.4.1 昆虫细胞复苏 | 第70页 |
| 2.4.2 昆虫细胞冻存 | 第70页 |
| 2.4.3 昆虫细胞传代培养 | 第70-71页 |
| 2.4.4 昆虫细胞转染 | 第71-72页 |
| 2.4.5 昆虫杆状病毒扩增 | 第72页 |
| 2.4.6 昆虫杆状病毒系统表达重组蛋白 | 第72-73页 |
| 2.5 Ni柱纯化His标签蛋白 | 第73页 |
| 2.6 实验材料 | 第73-75页 |
| 第三章 Wnt信号通路在软骨发育中的功能研究 | 第75-102页 |
| 3.1 引言 | 第75-76页 |
| 3.2 实验结果 | 第76-98页 |
| 3.2.0 生长板软骨中的Wnt蛋白的表达 | 第76-77页 |
| 3.2.1 Col2-Cre; Wlsc/c条件敲除小鼠构建 | 第77-79页 |
| 3.2.2 Col2-Cre; Wlsc/c小鼠的软骨内骨化过程受到影响 | 第79-83页 |
| 3.2.3 Col2-Cre; Wlsc/c小鼠的软骨肥大化和软骨膜的骨化受到影响 | 第83-86页 |
| 3.2.4 Col2-Cre; Wlsc/c小鼠的生长板软骨细胞的增殖速度下降、凋亡增多 | 第86-89页 |
| 3.2.5 Col2-Cre; Wlsc/c小鼠的增殖软骨细胞的形态和排列的变化 | 第89-91页 |
| 3.2.6 Col2-Cre; Wlsc/c小鼠增殖软骨的细胞分裂方向被打乱了 | 第91-93页 |
| 3.2.7 在成骨细胞中敲除Wls导致肥大化软骨区域变窄，同时骨量下降 | 第93-98页 |
| 3.3 讨论 | 第98-100页 |
| 3.4 总结与展望 | 第100-102页 |
| 第四章 Sost蛋白的功能结构研究和蛋白表达 | 第102-112页 |
| 4.1 引言 | 第102页 |
| 4.2 实验结果 | 第102-109页 |
| 4.2.1 Sost蛋白的活性位点的预测和点突变构建 | 第102-104页 |
| 4.2.2 Sost点突变对抑制Wnt信号通路的能力的影响 | 第104-107页 |
| 4.2.3 Sost蛋白的表达和纯化 | 第107-109页 |
| 4.3 讨论 | 第109-110页 |
| 4.4 总结与展望 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 | 第120页 |
