| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 真菌减数分裂的转录调控 | 第11-13页 |
| 1.1.1 早期基因的调控 | 第11-12页 |
| 1.1.2 中期基因的调控 | 第12-13页 |
| 1.1.3 中后期和后期基因的调控 | 第13页 |
| 1.2 植物病原真菌中氮源代谢和相关调控基因的表达 | 第13-15页 |
| 1.2.1 缺氮环境对病原菌侵染的影响 | 第13-14页 |
| 1.2.2 氮素饥饿诱导效应子基因的表达 | 第14页 |
| 1.2.3 植物病原真菌中的氮素调控基因 | 第14页 |
| 1.2.4 氮素缺失与寄主基础营养条件的关系 | 第14-15页 |
| 1.3 丝状真菌(构巢曲霉)中在营养缺陷条件下有关调控胞外蛋白酶的相关基因研究 | 第15-17页 |
| 1.3.1 构巢曲霉中胞外蛋白酶产生的相关机制 | 第15页 |
| 1.3.2 构巢曲霉中在氮源,碳源缺陷条件下若干调控胞外蛋白酶基因的鉴定 | 第15-16页 |
| 1.3.3 构巢曲霉中由xprG介导响应氮源,碳源缺陷的信号途径 | 第16-17页 |
| 1.4 稻瘟病菌产孢及其侵染致病机制 | 第17-19页 |
| 1.4.1 稻瘟病菌侵染过程 | 第17-18页 |
| 1.4.2 产孢在稻瘟病菌侵染循环及致病过程中的重要性 | 第18页 |
| 1.4.3 稻瘟病菌产孢的遗传规律分析 | 第18-19页 |
| 1.5 本研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 供试质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 供试植物 | 第20页 |
| 2.1.4 培养基 | 第20页 |
| 2.1.5 生化试剂 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-30页 |
| 2.2.1 蛋白序列获得与分析 | 第21页 |
| 2.2.2 稻瘟病菌基因组DNA的提取及质量的检测 | 第21页 |
| 2.2.3 DNA琼脂糖电泳 | 第21-22页 |
| 2.2.4 PCR扩增 | 第22页 |
| 2.2.5 PCR产物的胶回收 | 第22页 |
| 2.2.6 PCR产物的TA克隆 | 第22-23页 |
| 2.2.7 Escherichia coli DH5 α感受态细胞的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.8 感受态细胞的转化 | 第24页 |
| 2.2.9 质粒DNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.10 质粒酶切与连接 | 第24-25页 |
| 2.2.11 MGG_00622.、MGG_00729.、MGG_01475.敲除载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.2.12 MGG_00622.、MGG_00729.、双.敲除载体的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.13 稻瘟病菌原生质体制备和转化 | 第27-28页 |
| 2.2.14 MGG_00622与MGG_00729双敲除突变体的原生质体与转化策略同上 | 第28页 |
| 2.2.15 xprG各基因功能缺失突变体与野生型菌株KA3有性交配 | 第28页 |
| 2.2.16 稻瘟病菌突变体的表型观察 | 第28-29页 |
| 2.2.16.1 菌落生长速度测定 | 第28页 |
| 2.2.16.2 产孢量统计及细胞形态观察 | 第28页 |
| 2.2.16.3 孢子萌发及附着胞形成试验 | 第28页 |
| 2.2.16.4 大麦离体接种试验 | 第28-29页 |
| 2.2.16.4.1 非造伤接种 | 第28-29页 |
| 2.2.16.4.2 造伤接种 | 第29页 |
| 2.2.16.5 水稻致病性鉴定 | 第29页 |
| 2.2.17 xprG各基因功能缺失突变体与对照菌株Δku70在不同氮源和碳源的基础培养基上的生长 | 第29页 |
| 2.2.18 数据统计分析方法 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-57页 |
| 3.1 稻瘟病菌XprG同源蛋白生物信息学分析 | 第30-32页 |
| 3.2 稻瘟病菌Mgg_00622的结构和功能分析 | 第32-37页 |
| 3.2.1 Mgg_00622敲除载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.2.2 Mgg_00622敲除突变体的筛选与验证 | 第33-34页 |
| 3.2.3 稻瘟病菌Mgg_00622敲除突变体的表型分析 | 第34-37页 |
| 3.2.3.1 Mgg_00622缺失引起产孢量减少,但不影响分生孢子和附着胞形态 | 第34-35页 |
| 3.2.3.2 Mgg_00622敲除突变体的分生孢子分化出正常的附着胞,但分化时间推迟 | 第35-36页 |
| 3.2.3.3 Mgg_00622功能缺失突变体没有导致稻瘟病菌菌丝生长有明显减慢,且菌丝形态正常 | 第36页 |
| 3.2.3.4 Mgg_00622的敲除对稻瘟病菌的侵染和致病能力无显著影响 | 第36-37页 |
| 3.3 稻瘟病菌Mgg_00729的结构和功能分析 | 第37-42页 |
| 3.3.1 Mgg_00729敲除载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.3.2 Mgg_00729敲除突变体的筛选与验证 | 第38页 |
| 3.3.3 稻瘟病菌Mgg_00729敲除突变体的表型分析 | 第38-42页 |
| 3.3.3.1 Mgg_00729缺失引起产孢量减少,但不影响分生孢子和附着胞形态 | 第38-39页 |
| 3.3.3.2 Mgg_0729敲除突变体的分生孢子分化出正常的附着胞,但分化时间推迟 | 第39-41页 |
| 3.3.3.3 Mgg_00729功能缺失突变体没有导致稻瘟病菌菌丝生长有明显减慢,且菌丝形态正常 | 第41页 |
| 3.3.3.4 Mgg_00729的敲除对稻瘟病菌的侵染和致病能力无显著影响 | 第41-42页 |
| 3.4 稻瘟病菌Mgg_01475的结构和功能分析 | 第42-47页 |
| 3.4.1 Mgg_01475敲除载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.4.2 Mgg_01475敲除突变体的筛选与验证 | 第43页 |
| 3.4.3 稻瘟病菌Mgg_01475敲除突变体的表型分析 | 第43-47页 |
| 3.4.3.1 Mgg_01475缺失引起产孢量减少,但不影响分生孢子和附着胞形态 | 第43-44页 |
| 3.4.3.2 Mgg_01475敲除突变体的分生孢子分化出正常的附着胞,但分化时间推迟 | 第44-45页 |
| 3.4.3.3 Mgg_01475功能缺失突变体没有导致稻瘟病菌菌丝生长有明显减慢,且菌丝形态正常 | 第45-46页 |
| 3.4.3.4 Mgg_01475的敲除对稻瘟病菌的侵染和致病能力无显著影响 | 第46-47页 |
| 3.5 稻瘟病菌Mgg_00622与Mgg_00729双敲出突变体的构建与表型分析 | 第47-53页 |
| 3.5.1 Mgg_00622与Mgg_00729双敲敲除载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.5.2 Mgg_00622与Mgg_00729双敲除突变体的筛选与验证 | 第48-49页 |
| 3.5.3 稻瘟病菌Mgg 00622与Mgg_00729双敲除突变体的表型分析 | 第49-53页 |
| 3.5.3.1 Mgg_00622与Mgg_00729的双突变引起产孢量减少,但不影响分生孢子和附着胞形态 | 第49-50页 |
| 3.5.3.2 Mgg_00622与Mgg 00729的双突变体的分生孢子分化出正常的附着胞,但分化时间推迟 | 第50-51页 |
| 3.5.3.3 Mgg_00622与Mgg_00729的双突变体没有导致稻瘟病菌菌丝生长有异常,且菌丝形态正常 | 第51-52页 |
| 3.5.3.4 Mgg_00622与Mgg_00729双敲除对稻瘟病菌的侵染和致病能力无显著影响 | 第52-53页 |
| 3.6 稻瘟病菌中三个XprG功能缺失突变体及Mgg_00622与Mgg_00729双敲除突变体对于碳源和氮源代谢的影响 | 第53-55页 |
| 3.6.1 各个基因功能突变体和双突变体在BSA作为碳源的基础(MM)培养上的生长情况 | 第53页 |
| 3.6.2 各个基因功能突变体和双突变体在以葡萄糖为碳源的基础(MM)培养基上的生长情况 | 第53-54页 |
| 3.6.3 各个基因功能突变体和双突变体在BSA作为氮源的基础(MM)培养上的生长情况 | 第54-55页 |
| 3.7 稻瘟病菌中三个XprG功能缺失突变体及Mgg_00622与Mgg_00729双敲除突变体对有性交配能力的影响 | 第55-57页 |
| 4 小结与讨论 | 第57-60页 |
| 4.1 Mgg00622、Mgg00729和Mgg01475在进化过程中产生特异性 | 第57页 |
| 4.2 Mgg00622、Mgg00729和Mgg01475对于稻瘟病菌无性产孢和有性子囊孢子形成的影响 | 第57-58页 |
| 4.3 Mgg00622、Mgg00729和Mgg01475调控稻瘟病菌对外界营养缺陷的相应 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 附录 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
